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动力-硝酸盐培养基生化管的实验原理及方法

杨永帅
录入时间:2019-3-8 10:21:45 来源:青岛海博生物

一、实验原理:

  蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、矿物质;硝酸钾被某些细菌还原为亚硝酸盐,如大肠埃希菌;有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵;有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮,如假单胞菌等。硝酸盐还原试验是测定还原过程中所产生的亚硝酸。亚硝酸盐与醋酸作用,生成亚硝酸,亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸,后者与α-萘胺结合生成N-α萘胺偶苯磺酸。做此试验时,应以一支未接种细菌的培养基做对照试验,只有对照管阴性时,才能判定。结果判定:出现红色为阳性反应。如欲检查培养基中硝酸盐是否被分解,可取锌粉少许加入培养基内,如出现红色表明硝酸盐仍存在;若不出现红色,表示硝酸盐已被分解。较少量的琼脂作为培养基的凝固剂。

二、试验方法:

  取新鲜质控菌株斜面,用接种针挑取菌苔穿刺接种至生化管中,36±1℃培养24h后,观察结果,再按顺序滴加硝酸盐还原试剂,观察实验结果。

三、结果判定:

  接种以下质控菌株,36±1℃需氧培养24小时:

质控菌株

菌株编号

生长情况

其他特征

大肠埃希氏菌

ATCC25922

良好

扩散生长,加硝酸盐还原试剂甲乙液各两滴变红色

蜡样芽胞杆菌

ATCC11778

良好

扩散生长,加硝酸盐还原试剂甲乙液各两滴变红色

产气荚膜梭菌

ATCC13124

良好

无动力,加硝酸盐还原试剂甲乙液各两滴变红色

单增李斯特氏菌

ATCC19114

良好

扩散生长,加硝酸盐还原试剂甲乙液各两滴不变色

 


图1-1  动力-硝酸盐培养基微生物质控结果

备注:a:大肠埃希氏菌,b: 蜡样芽胞杆菌,c: 产气荚膜梭菌,d:单增李斯特氏菌,e:空白对照

 

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