一、实验原理：
用于食品中大肠杆菌的平板计数,其中蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;乳糖是可发酵的糖类;氯化钠可维持均衡的渗透压;胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;中性红为pH指示剂;琼脂为凝固剂;大肠埃希氏杆菌含有的葡萄糖醛酸苷酶作用于4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷的β糖醛酸苷键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。97%的大肠埃希氏杆菌、10%的沙门氏菌以及少量的志贺氏菌具有葡萄糖醛酸苷酶。
二、试验方法：
称取本品41.6g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，煮沸2分钟。冷却至45-50℃左右时，备用。无需高压灭菌。
1、制备质控菌液。
2、选择合适稀释度的目标菌质控菌液1ml，接种到两个无菌平皿中，将10ml-15ml冷至45±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基和目标菌质控菌液充分混匀。待琼脂凝固后，再加入3ml-4ml的VRB-MUG琼脂覆盖平板表层。
3、用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环，将接种环接触容器边缘3次，去除多余液体，在平板表面划六条平行直线，同时接种两个平板。
4、36±1℃倒置培养基培养18-24小时，记录实验结果。
三、结果判定：接种以下质控菌株，36±1℃需氧培养18-24小时：
|
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
生长情况 |
回收率 |
其他特征 |
|
金黄色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
/ |
G≤1 |
/ |
/ |
|
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
20-200 |
+++ |
≥70% |
紫红色菌落，有荧光 |
|
产气肠杆菌 |
ATCC13048 |
20-200 |
+++ |
≥70% |
紫红色菌落，无荧光 |
|
弗氏柠檬酸盐杆菌 |
ATCC43864 |
20-200 |
+++ |
≥70% |
紫红色菌落，无荧光 |
图1-2 VRB-MUG琼脂微生物质控结果
备注：A：正常情况下拍摄，B：366nm紫外灯下拍摄；
a:金黄色葡萄球菌，b:大肠埃希氏菌，c:产气肠杆菌，d:弗氏柠檬酸盐杆菌
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