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VRB-MUG琼脂培养基的实验原理及方法

杨永帅
录入时间:2019-4-30 11:28:52 来源:青岛海博生物

一、实验原理:

  用于食品中大肠杆菌的平板计数,其中蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;乳糖是可发酵的糖类;氯化钠可维持均衡的渗透压;胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌,特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;中性红为pH指示剂;琼脂为凝固剂;大肠埃希氏杆菌含有的葡萄糖醛酸苷酶作用于4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷的β糖醛酸苷键,使其水解,释放的4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。97%的大肠埃希氏杆菌、10%的沙门氏菌以及少量的志贺氏菌具有葡萄糖醛酸苷酶。

二、试验方法:

  称取本品41.6g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸2分钟。冷却至45-50℃左右时,备用。无需高压灭菌。

  1、制备质控菌液。

  2、选择合适稀释度的目标菌质控菌液1ml,接种到两个无菌平皿中,将10ml-15ml冷至45±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)倾注于每个平皿中。小心旋转平皿,将培养基和目标菌质控菌液充分混匀。待琼脂凝固后,再加入3ml-4ml的VRB-MUG琼脂覆盖平板表层。

  3、用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次,去除多余液体,在平板表面划六条平行直线,同时接种两个平板。

  4、36±1℃倒置培养基培养18-24小时,记录实验结果。

三、结果判定:接种以下质控菌株,36±1℃需氧培养18-24小时:

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

生长情况

回收率

其他特征

金黄色葡萄球菌

ATCC25923

/

G≤1

/

/

大肠埃希氏菌

ATCC25922

20-200

+++

≥70%

紫红色菌落,有荧光

产气肠杆菌

ATCC13048

20-200

+++

≥70%

紫红色菌落,无荧光

弗氏柠檬酸盐杆菌

ATCC43864

20-200

+++

≥70%

紫红色菌落,无荧光


图1-2  VRB-MUG琼脂微生物质控结果

备注:A:正常情况下拍摄,B:366nm紫外灯下拍摄;

a:金黄色葡萄球菌,b:大肠埃希氏菌,c:产气肠杆菌,d:弗氏柠檬酸盐杆菌

 

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