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去氧胆酸盐琼脂(DC)使用原理及方法

杨永帅
录入时间:2019-6-6 15:16:10 来源:青岛海博生物

一、实验原理:

用于大肠菌群的固体平板检测,其中蛋白胨提供氮源;乳糖提供碳源;去氧胆酸钠是一种抑菌剂,主要抑制革兰氏阳性菌的生长;磷酸氢二钾是一种缓冲体系;柠檬酸铁和柠檬酸钠是一种生长促进剂;中性红是一种指示剂,在酸性时呈红色,当大肠菌群发酵乳酸时产生酸性物质,所以菌落呈红色;氯化钠是维持细菌生长时的渗透压;琼脂是一种凝固剂。

二、试验方法:

称取本品43.0g,加入1000ml蒸馏水,加热溶解并不停搅拌,煮沸1分钟。冷却至45-50℃左右时,倾入无菌平皿,无需高压灭菌。使用前,把制备好的平板放置室温10-20分钟。

1、制备质控菌液。

2、选择合适稀释度的目标菌质控菌液0.1ml,均匀涂布于平板上,每一稀释度接种两个平板。

3、用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次去除多余液体,在平板表面划六条平行直线,同时接种两个平板。

4、35℃倒置培养基培养24小时,记录实验结果。

三、结果判定:

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

生长情况

回收率

其他特征

金黄色葡萄球菌

ATCC25923

/

G≤1

/

/

大肠埃希氏菌

ATCC25922

20-200

+++

≥70%

红色菌落

伤寒沙门氏菌

ATCC14028

20-200

+++

≥70%

无色透明菌落

弗氏柠檬酸盐杆菌

ATCC43864

20-200

+++

≥70%

红色菌落

阴沟肠杆菌

ATCC23355

20-200

+++

≥70%

红色菌落


      

图1-2 去氧胆酸盐琼脂微生物质控结果

备注:a:金黄色葡萄球菌,b:大肠埃希氏菌,c:伤寒沙门氏菌,d:弗氏柠檬酸盐杆菌,e:阴沟肠杆菌

 

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