0.5%碱性复红使用方法及现象

一、用途及原理

苏云金芽孢杆菌在形成芽孢的同时，会在芽孢旁边生成一颗菱形、方形或不规则形状的碱溶性蛋白晶体，称为伴孢晶体。该晶体易被碱性染料着色，用碱性复红染色后，可在显微镜下观察到深红色晶体。

此现象为苏云金芽孢杆菌的特征反应，在《GB4789.14-2014 蜡样芽胞杆菌检验》中，该实验为区分蜡样芽胞杆菌和苏云金芽孢杆菌的唯一方法。

二、成分

碱性复红···············0.5g

乙醇·················20mL

蒸馏水················80mL

三、操作方法

1、挑取纯培养的单个可疑菌落接种于硫酸锰营养琼脂平板上，30℃±1℃培养24 h±2 h， 并于室温放置3 d～4 d；

2.挑取培养物少许于载玻片上，滴加蒸馏水混匀并涂成薄膜。经自然干燥，微火固定；

3.加甲醇作用30 s后倾去，再通过火焰干燥，于载玻片上滴满0.5%碱性复红，放火焰上加热（微见蒸气，勿使染液沸腾)持续1 min～2 min，移去火焰，再更换染色液再次加温染色30 s，倾去染液用洁净自来水彻底清洗、晾干后镜检。

4.油镜下观察有无游离芽胞（浅红色）和染成深红色的菱形蛋白结晶体。

四、试验结果

①形态的深红色菱形或方形晶体为伴孢晶体

②形态的椭圆形或卵圆形物的为菌体芽孢，一般很难着色

③形态的红色杆状物为苏云金芽孢杆菌菌体

注：如发现游离芽胞形成的不丰富，应再将培养物置室温2d～3d后进行检查。 除苏云金芽胞杆菌外，其他芽胞杆菌不产生蛋白结晶体。

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