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常见问题解答

在琼脂培养基制备过程中,灭菌前没有进行加热煮沸溶解,结果发现灭菌后的培养基制成的平板部分凝固性不好,或瓶内的培养基出现分层现象(底层凝固,上层不凝固),是怎么回事?


  这是由于琼脂分布不均导致的。琼脂的比重较大,易下沉至底部,高压灭菌后虽然从外观上看培养基澄清透明,琼脂已经完全溶解,但实际上琼脂仍然集中溶解在底部,导致上层含有极少量琼脂,下层含有大量琼脂,因此制成的平板会出现部分不凝固或凝固不完全的现象,瓶内的培养基冷却后出现分层,下层因含大量琼脂而呈固态,上层琼脂少呈液态。在灭菌前若加热煮沸使琼脂完全溶解分布均匀,灭菌后就不会出现此现象。若灭菌前未进行加热溶解,则灭菌后使用前需充分摇匀,确保溶解在底层的琼脂均匀分散开,也可避免出现平板不凝固或凝固不均匀的问题。
  此外,偏酸的环境不利于琼脂的凝固。因此在制备一些pH偏酸的培养基时(pH<4.5),需将琼脂与其他成分分开灭菌,冷却至50℃左右再混合均匀制成平板。在培养基的制备时若出现琼脂不凝固,也有可能是因为配制或灭菌过程出现问题,导致培养基的pH过低,琼脂不能凝固。

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