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【原理】
甲烷细菌是一类严格厌氧细菌。其可利用CO2，和H2，或乙酸、甲醇等作碳源和能源，可利用无机铵盐作氮源，还需要若干微量元素等。据此，配制本培养基时要将培养基中氧气排除，并将甲烷细菌的这些营养成分分装在无氧试管中，灭菌后用。
【成分】
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a．液磷酸氢二钾 |
348mg |
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磷酸二氢钾 |
227mg |
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氯化铵 |
500mg |
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硫酸镁 |
500mg |
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硫酸铁(FeSO4·7H20) |
2mg |
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氯化钙(CaCl2·2H20) |
250mg |
| H2/CO2(80/20)0.2Pa |
0.2Pa(20℃）或 |
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乙酸钠 |
100mmol |
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甲醇 |
200mmol |
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三甲氨 |
100mmol |
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琼脂（液体培养基不加） |
20g |
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氯化钠 |
2.25g |
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刃天青 |
1mg |
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碳酸氢钠 |
850mg |
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蒸留水 |
1000ml |
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微量元素溶液(b液） |
3ml |
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维生素溶液(c液） |
10ml |
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b．半胱氨酸 |
300mg/L |
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c.Na2S.nH2O(n=7-9) |
300mg/L |
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按照配方a准确秤量，磁力搅拌溶解混匀，倒入烧瓶中加热沸腾使刃青天褪色后，将烧瓶置于冰浴冷却，同时将无氧的CO2/N2(20/80）充入烧内的培养液中，排除其中剩余的氧15分钟，然后用26%NaOH溶液调至pH7.0，接着将培养液分装于无氧小试管中，每管5ml，并在试管气相部分充人H2/CO2(80/20)，立即用胶塞密封，121℃灭菌30分钟备用。
b、c液配制：先量取若干蒸馏水分别放入二只玻璃中，然后分别充入无氧N210分钟，再将预先秤好的b、c溶质分别加入玻璃中，立即用胶塞塞紧，并用铝盖固定，121℃灭菌30分钟备用。
【用途】
分离培养和鉴定甲烷细菌。
【注意事项】
液体培养基在使用之前，要用无菌注射器先经无氧N2冲洗，然后取一定量的b、c溶液注入培养液a中，
充分摇匀后再接种。固体滚管培养基，加热溶化后冷却至55℃左右，加入一定量的b、c溶液，充分摇匀后，立即在冰屑上迅速滚动，使培养基在管壁均匀凝固，然后用无菌接种环取少量菌体，在滚管壁培养基上划线，同时充入无氧的N2/CO2,或H2/CO2(80/20)，接种完毕立即塞紧胶塞培养。
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