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【原理】
醋酸纤维膜是由醋酸纤维素制成的均一薄膜，对分子移动无阻力,是免疫球蛋白鉴定的一种简单快速的电泳方法。血清蛋白在一定的pH下都带有电荷,由于各种蛋白质的等电点及分子量的不同,所带的电荷也就各不相同,在直流电场的作用下,它们在醋酸纤维膜上泳动的速度也不一样,经过一段时间泳动后,即可彼此分开,形成电泳图谱。
(一)巴比妥缓冲液(pH8.6,离子强度(μ)0.05)
【成分】
|
5.5二乙基巴比妥钠 |
10.3g |
|
5.5二乙基巴比妥酸 |
1.84g |
|
蒸馏水 |
1000ml |
【制法】
将以上两种成分加入蒸馏水中,加热溶解即可，
【用途】
蛋白电泳用。
(二)染色液
1.0.05%氨基黑染液
【成分】
|
氨基黑10B |
0.5g |
|
1mol 醋酸 |
500ml |
|
0.1mol 酸酷钠 |
500ml |
【制法】
先将醋酸和醋酸钠溶液混匀后,再加入氨基黑粉剂,待充分混匀溶解后,即可使用。
2.0.25%氨基黑染液
【成分】
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氨基黑10B |
1.0g |
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甲醇 |
200ml |
|
冰醋酸 |
40ml |
|
蒸馏水 |
160ml |
【制法】
先将后3种成分混匀,然后再加入氨基黑混匀溶解后,即可使用。
【用途】
用于经电泳后之醋酸纤维膜标本的染色。
(三)5%醋酸脱色液
【成分】
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甲醇 |
90ml |
|
醋酸 |
10ml |
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蒸馏水 |
100ml |
【制法】
把以上3种成分混合摇匀后,即可使用。
【用途】
用于经染色后之醋酸纤维膜电泳标本的脱色。
(四)透明液
【成分】
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95%乙醇 |
7份 |
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冰醋酸 |
3份 |
【制法】
将以上两种成分混匀后,即可使用。
【用途】
用于“染过色的醋酸纤维膜电泳标本”的透明。
(五)蛋白洗脱液
【成分】
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1N 氢氧化钠 |
500ml |
|
0.1N EDTA |
50ml |
|
蒸馏水 |
500ml |
【制法】
将以上3种成分混匀后即可使用。
【用途】
用于洗脱醋酸纤维膜的蛋白带。
注:此液用于洗脱氨基黑染色的蛋白带,而丽春红R或S染的蛋白带则用0.4NNaOH 溶液。
(第二军医大学蔡燕刚、吴挹芳编 吴挹芳审)
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