幽门螺旋杆菌是一种革兰氏阴性杆菌,螺旋形、微需氧、对生长条件要求十分苛刻。以下将从培养基、培养时间、气体条件、培养湿度温度等几方面进行介绍。
1、常用培养基:布氏琼脂(Brucella agar)或脑心浸液琼脂(Brain Heart Infusion agar)。
(1)需添加营养成分:需加入5-10%的脱纤维羊血或马血,提供必要的生长因子。
(2)可添加抑菌剂:为抑制杂菌,可加入万古霉素、两性霉素B等抗生素。
(3)海博培养基推荐:HB8646 幽门螺旋杆菌固体培养基。
2、气体环境
培养幽门螺旋杆菌最重要的是提供合适的气体环境,幽门螺旋杆菌为微需氧培养基,菌需要5-10%的氧气、5-10%的二氧化碳和80-90%的氮气,培养时需要保持微需氧环境的稳定,可使用气体培养箱进行培养。
3、培养温湿度
(1)温度:37°C,接近人体体温
(2)湿度要求:培养环境需保持高湿度,通常在95%以上。
4、培养时间
通常需要3-5天,有时延长至7天。
5、pH值
培养基的pH应保持在6.0-7.0之间,有利于幽门螺旋杆菌的生长。
6、接种与培养
(1)样本处理:胃黏膜活检样本需尽快接种,避免暴露于空气过久。
(2)接种方法:样本研磨后均匀涂布于培养基表面。
(3)培养时间:3-7天,幽门螺杆菌生长较慢。
7、生化特性:
(1)尿素酶阳性
原理:幽门螺杆菌能够分泌大量的尿素酶,将尿素分解为氨和二氧化碳。产生的氨可以中和胃酸,在细菌周围形成微环境,保护细菌免受胃酸的侵蚀。
(2)氧化酶和过氧化氢酶试验阳性
原理:幽门螺杆菌具有氧化酶活性,能够氧化细胞色素c。含有过氧化氢酶能够分解过氧化氢(H₂O₂)为水和氧气。
8、生理特性
(1)耐酸性:能够在强酸环境中生存,主要通过分泌尿素酶分解尿素产生氨,中和胃酸,除了尿素酶产生的氨中和胃酸外,幽门螺杆菌还具有其他耐酸机制,如质子泵和酸休克蛋白。这些机制使细菌能够在强酸环境中生存和繁殖。
(2)形态观察:革兰氏染色呈阴性,螺旋状或弯曲杆状。
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