致泻大肠埃希氏菌生化检验

一、介绍

  致泻大肠埃希氏菌（Diarrheagenic Escherichia coli）是一类能够引起人类腹泻及其他胃肠道疾病的重要病原菌。作为大肠埃希氏菌（Escherichia coli）的致病性亚群，致泻大肠埃希氏菌根据其毒力因子和致病机制的不同，可分为多种类型，包括肠致病性大肠埃希氏菌（EPEC）、肠产毒性大肠埃希氏菌（ETEC）、肠侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）以及肠集聚性大肠埃希氏菌（EAEC）等。这些菌株通过污染食品、水源或接触传播，成为全球范围内食源性疾病和腹泻爆发的主要病因之一，尤其在卫生条件较差的地区，其危害更为显著。

  随着全球食品贸易的快速增长和饮食习惯的多样化，食品安全问题日益受到关注。致泻大肠埃希氏菌因其广泛的传播途径和较强的致病性，成为食品安全监测的重点对象。快速、准确地检测和鉴定食品中的致泻大肠埃希氏菌，对于预防食源性疾病、保障公众健康以及维护食品安全体系具有重要意义。生化检验作为微生物检测的重要手段之一，能够通过菌株的代谢特性、酶活性等生化特征，对其进行有效鉴定和分类，为食品安全风险评估和疾病防控提供科学依据。

  本文旨在探讨致泻大肠埃希氏菌的生化检验方法，分析其在实际检测中的试验方法及注意细节。

二、生化试验判别方法

  致泻大肠埃希氏菌检验用生化试验分别为三糖铁琼脂（TSI）、蛋白胨水（色氨酸肉汤）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾肉汤（KCN）、氧化酶试纸试验，其中氰化钾肉汤包含氰化钾试验生化管和氰化钾试验对照，生化结果判别及试验方法如表1所示。

表1 致泻大肠埃希氏菌检验用生化试验罗列

三、生化试验检验方法及结果

  本生化试验可参考食品安全国家标准《GB4789.6-2016食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》，6.4生化试验部分。从MAC和EMB选择平板上挑取乳糖发酵、乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落，为分离纯化，三区划线于营养琼脂平板上，并于36℃±1℃培养18h~24h。本次示例试验从MAC和EMB上共挑取四种菌落（标记为1号~4号）进行划线分离，如图1所示，分离纯化结果应保证三区有单菌落，如图2所示，否则应继续纯化。

图1 EMB和MAC平板上的1号~4号菌落

图2 三区划线分离纯化示例

  取纯化培养物于1mL-2mL生理盐水中，制备成高浓菌悬液，如图3所示。

图3 高浓菌悬液示图

  取纯化培养物“之”字划线并穿刺接种于三糖铁琼脂和尿素琼脂，于36℃±1℃培养18h~24h。试验结果如图4所示。

图4 三糖铁琼脂和尿素琼脂试验结果

  由图4可知，1、3号菌落TSI琼脂变黑，说明产H2S阳性，可直接判别为非大肠埃希氏菌。

  同时取高浓菌悬液100μL至蛋白胨水、氰化钾肉汤、氰化钾试验对照管中，于36℃±1℃培养18h~24h。试验结果如图5所示。

1、3号试验结果相同              2、4号试验结果相同

图5 氰化钾和蛋白胨水试验结果

  由图4、图5可知，2、4号菌落TSI斜面产酸（变黄）、底层产酸（变黄）、产H₂S阴性（TSI琼脂不变黑），靛基质阳性（蛋白胨水滴加Kovacs氏靛基质试剂后变红）和尿素琼脂阴性（变黄），因此，基本可判别2、4号菌落为大肠埃希氏菌，为进一步验证，对其进行氧化酶试验及革兰氏染色，氧化酶试验结果阳性及革兰氏染色结果阴性，如图6所示。

图6 氧化酶试制试验及革兰氏染色结果

  至此，可判别该样品中存在大肠埃希氏菌，为进一步判别致泻大肠埃希氏菌，应进行PCR确认试验。

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图7 BHI致泻大肠埃希氏菌生化鉴定条

五、注意事项

  1.三糖铁琼脂的配制、试验方法可参考视频“三糖铁实验操作视频”。

  2.氰化钾试验的方法及注意事项可参考文章“KCN生化反应注意事项”。

  3.氧化酶试纸试验方法可参考视频“氧化酶实验”。

注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。

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