李斯特氏菌的协同溶血试验

一、试验简介

  李斯特氏菌协同溶血试验（CAMP试验）是一种用于检测李斯特氏菌（特别是单增李斯特氏菌，Listeria monocytogenes）与其他细菌（如金黄色葡萄球菌或马红球菌）之间协同溶血作用的试验方法。该试验是鉴定李斯特氏菌的重要方法之一，尤其在区分致病性李斯特氏菌和非致病性菌株时非常重要。

二、试验原理

  CAMP试验基于细菌溶血素之间的协同作用。单增李斯特氏菌能够产生一种称为李斯特菌溶血素O（LLO，Listeriolysin O）的毒素，这种毒素可以溶解红细胞。在CAMP试验中，单增李斯特氏菌与金黄色葡萄球菌（菌株ATCC 25923）共同培养时，金黄色葡萄球菌产生的β-溶血素会增强单增李斯特氏菌的溶血作用，从而在两种细菌的交界处形成明显的箭头状溶血区。马红球菌产生的胆固醇氧化酶也可以增强某些细菌溶血素的作用。

三、试验方法

  1. 培养基制备：使用含5%-7%羊血或马血的血琼脂平板（HB8519-1 7%羊血琼脂基础+1001339-1 脱纤维羊血/HBPM6235 血平皿平板）。

  2. 划线接种：在羊血琼脂平板上平行划线接种金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）和马红球菌，挑取纯培养的单个可疑菌落垂直划线接种于平行线之间，垂直线两端不要触及平行线，距离1mm~2mm，同时接种单增李斯特氏菌、英诺克李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌，于36℃±1℃培养24h~48h。

  3. 观察两种细菌交界处的溶血现象。若结果不明显，可置4℃冰箱24h~48h后再观察。

四、结果判断

  1. 单增李斯特氏菌在靠近金黄色葡萄球菌处出现约2mm的β-溶血增强区域，5%~8%的单增李斯特氏菌在马红球菌一端也有溶血增强现象；

  2. 斯氏李斯特氏菌在靠近金黄色葡萄球菌处出现微弱的溶血增强区域；

  3. 伊氏李斯特氏菌在靠近马红球菌处出现约5mm~10mm的“箭头状”β-溶血增强区域；

  4. 英诺克李斯特氏菌不产生溶血现象。

  接种菌株，放置于36℃±1℃需氧培养24h~48h，试验结果如图1所示。

图1 协同溶血试验结果

备注：单盲A：待测菌落；英李：英诺克李斯特氏菌ATCC 33090；单李：单增李斯特氏菌ATCC 19114；斯李：斯氏李斯特氏菌ATCC 35967；伊李：伊氏李斯特氏菌ATCC 19119；马红球：马红球菌CICC 22955；金葡：金黄色葡萄球菌ATCC 25923

五、注意事项

  1. 使用新鲜的血琼脂培养基以确保红细胞活性。

  2. 两种细菌的划线距离应适中（1mm-2mm），过近或过远可能影响结果。

  3. 建议同时接种已知协同溶血阳性和阴性李斯特氏菌作为对照。

  4. 协同菌株的选择：金黄色葡萄球菌必须使用菌株ATCC 25923，若使用其他金黄色葡萄球菌菌株，可能会影响单增李斯特氏菌协同溶血现象的观察，结果如图2所示。具体原因可参考往期原创文章：《细菌溶血试验原理及现象》。

图2 协同溶血试验结果

备注：单盲B：待测菌落；英李：英诺克李斯特氏菌ATCC 33090；单李：单增李斯特氏菌ATCC 19114；斯李：斯氏李斯特氏菌ATCC 35967；伊李：伊氏李斯特氏菌ATCC 19119；马红球：马红球菌CICC 22955；金葡：金黄色葡萄球菌ATCC 6538

注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。

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