2025版GB4789.38大肠埃希氏菌检验标准更新解读

1.大肠埃希氏菌术语和定义的描述更改

旧版本的标准中大肠埃希氏菌描述为IMViC（靛基质、甲基红、VP、柠檬酸盐利用）试验为“++--”或“-+--”，新标准则改成了“具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，能分解5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷，在胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(Tryptone BileX- glucuronide，TBX)琼脂上形成蓝绿色菌落，”这样更改的目的也是后面鉴定方法的更改。相比较于IMViC试验，新标准以是否含β-葡萄糖醛酸苷酶做为鉴定依据，在试验操作上更为简单明了。但需注意新标准在检验原理上的备注描述：“绝大多数大肠埃希氏菌具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，但大肠埃希氏菌O157等菌株没有β-葡萄糖醛酸苷酶活性。另外，肠杆菌科内一些志贺氏菌、沙门氏菌等菌株也具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性”，这代表实际检验中有漏检的可能，一些致病性大肠埃希氏菌因不含β-葡萄糖醛酸苷酶，在TBX培养基上不会有显色反应。还有少数沙门和志贺氏菌等菌株有β-葡萄糖醛酸苷酶，在TBX上则会出现与大肠杆菌相同的蓝绿色菌落，但这些菌在EC肉汤中44.5℃培养通常不会有产气现象，因此一般不会干扰最终结果。

2.LST和EC肉汤培养时间更改

旧标准中培养时间为48小时，新标准改为了24-48h，意味着在24h时如果观察到了产气的结果即可进行下一步，出现阳性结果可以缩短检验周期。

3.鉴定方法改变

旧标准中在EC肉汤出现产气结果后，需先转接EMB平板，再使用营养琼脂纯化，然后再做IMViC生化和革兰氏染色鉴定，需要3天时间，且项目繁琐。新标准则直接划线TBX平板进行鉴定，又简单又省时间。

4.MPN计数法贝类产品方法改变及附录C的增加

新标准中对于贝类产品的MPN法检验由每个稀释度接种3管改为了接种5管，总共需接种15管（其他样品一般是接种9管），提高了灵敏度和准确度，同时新增了附录C供贝类产品的检验结果查找。

5.TBX琼脂替换VRBA-MUG平板

在原理上，TBX琼脂和VRBA-MUG培养基是相同的，都是利用了大肠埃希氏菌含有的β-葡萄糖醛酸苷酶特异性分解底物产生特征性反应。但在实际使用中，VRBA-MUG则需借助紫外灯观察荧光反应，有时候一些样品也会有荧光反应，或者菌落混杂导致荧光现象不清晰，计数比较困难。而TBX琼脂在使用上则更为方便，不需要借助紫外灯，样品一般不会造成干扰，可直接计数蓝绿色菌落。

6.结果计算和报告

 旧标准选择“10-100CFU”菌数的平板，新标准则改成了15-150CFU菌数的平板，相对结果更为准确，在进行结果报告时，增加了更详细的说明，便于计算和报告。

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