大肠菌群培养基（日本）检验原理和使用方法

一、检验原理：

  大肠菌群（Coliforms）是指在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。一般认为该菌群细菌主要包括肠杆菌科中埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。所以食品中检出大肠菌群就表示食品受人、温血动物的粪便污染。

  该培养基用于大肠菌群的固体平板检测。蛋白胨提供微生物生长所需的碳源、氮源、维生素和生长因子；乳糖为可发酵的糖类；去氧胆酸钠和柠檬酸铁铵可抑制革兰氏阳性菌的生长；磷酸氢二钾为培养基pH缓冲剂；中性红为pH指示剂，发酵乳糖产酸的细菌菌落为红色，不发酵乳糖的细菌为无色；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂中性红的作用下形成可计数的红色，带有或不带有沉淀环的菌落。

二、培养基配方（g/L）：

三、试验方法：

  1. 称取本品45.0 g，加入1000 mL纯化水中，加热溶解并不停搅拌，煮沸1分钟，冷却至45℃-50℃左右时，倾入无菌平皿，备用。无需高压灭菌。

  2. 10倍梯度稀释法制备质控菌株菌悬液，吸取适宜梯度的菌悬液接种于待测培养基和参比培养基（HB0177-8胰蛋白胨大豆琼脂（TSA））。

  3. 放置于恒温培养箱36℃±1℃需氧培养18 h-24 h，观察试验结果。

四、试验结果判断：

  接种以下质控菌株，放置36℃±1℃需氧培养18 h-24 h，试验结果如图1所示。

图1 质控菌株在大肠菌群培养基（日本）上的生长情况

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