蜡样芽胞杆菌的活化、保存及鉴定

一、蜡样芽胞杆菌简介

  蜡样芽胞杆菌是广泛存在于自然界中的一种革兰氏阳性芽孢杆菌，部分菌株能产生毒素，若食品或水中的蜡样芽胞杆菌污染严重，人食用后可能引发食物中毒。由于蜡样芽胞杆菌能产生耐热性较强的芽孢，因此也常造成食物杀菌失败，产生腐败现象。在平板上的菌落表面呈毛玻璃蜡状，因此起名为蜡样芽胞杆菌。

二、蜡样芽胞杆菌的活化培养及保存

  蜡样芽胞杆菌对营养要求不高，易于培养，使用含蛋白胨或酵母浸粉的培养基即可生长良好，常用TSA/TSB、NA/NB、BHI、LB等培养基活化和培养，也可使用血平板。蜡样芽胞杆菌菌落酷似蜡状，菌落不规则且较大，在营养琼脂上培养18-24h即可达到3-5mm，在血琼脂上可观察到溶血现象，多数为β溶血，也有部分菌株为α溶血。

  常见的斜面保存法、半固体保存法、甘油冻存法、瓷珠保存法、脱脂牛奶保存法等方法均可用于蜡样芽胞杆菌的保存。由于蜡样芽胞杆菌可产芽孢，因此即使使用斜面2-8℃冷藏保存，也可轻松存活3个月以上。长期保存可使用瓷珠保存法、甘油冻存法或脱脂牛奶冷冻保存法，在-20℃或-70℃以下冷冻保存，温度越低保存期越长，一年以内可在-20℃保存，一年以上建议在-70℃以下保存。

三、蜡样芽胞杆菌的鉴定

  蜡样芽胞杆菌革兰氏染色为阳性杆菌，在MYP平板上菌落周围有晕环（卵黄反应+），过氧化氢酶+，酪蛋白分解+，溶菌酶耐性+，厌氧分解葡萄糖+，甘露醇产酸-，溶血+，根状生长-，蛋白质毒素晶体-，大多数菌株有动力，也有部分菌株无动力或动力不强。VP和硝酸盐还原反应通常为阳性，也有部分菌株反应为阴性。根据蜡样芽胞杆菌的VP反应、硝酸盐还原、西蒙氏柠檬酸盐利用、明胶液化及淀粉水解反应的不同，可分为15种生化群（详情可参考GB4789.14标准）。

  与苏云金芽孢杆菌的区分：蜡样芽胞杆菌与苏云金芽孢杆菌的生化反应几乎完全一致，平板上的菌落特征也几乎相同，通常生化反应难以区分，在GB4789.14标准是通过有无产生蛋白质毒素结晶进行区分。在分子生物学上，二者的亲缘关系很近，也有人认为苏云金芽孢杆菌属于蜡样芽胞杆菌的一种。

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