一、方法介绍
MPN(most probable number)计数法是应用统计学计算创造的一种计数方法,不同于常规的平板计数法,MPN计数法最终得到的结果并不是一个准确的数值,而是一个最大可能数和95%置信区间范围。此方法更多应用于目标菌含量低或者是特定生化种群的数量估测,在水质检测、食品及药品检测中常被使用,常见的有5管法、9管法、15管法等,本文主要讨论9管法。
二、九管法简介
九管法是最常用的MPN计数法,对样品进行测试时,至少需要接种3个稀释度,每个稀释度接种3管,总共接种9管。在进行试验之前,通常需要对样品中的大概含菌量有一个估算,然后选择适宜的3个稀释度进行接种,但有时候对样品中的含菌量把握不准确,为了保险起见,通常也会选择接种4-5个稀释度甚至更多的稀释度,通过培养后的结果选择3个适宜的稀释度,查MPN表读取结果。但是在读取结果时,选择不同的3个稀释度会得到不同的结果,例如做了5个稀释度,阳性结果显示为3/3/2/1/1,选择3/3/2或3/2/1或2/1/1三种情况的连续稀释度,最终得出的MPN值分别是1100,1500,2000,那么究竟选择哪种稀释度更为合适?在2025版的GB4789.3中给出了详细的说明。
三、稀释度的选择
(1)选择稀释度最高且3根管均为阳性的稀释度做为第一稀释度,而后两个稀释度为第二第三稀释度。如3/3/2/0/0选择3/2/0,3/3/3/2/1选择3/2/1,3/2/1/0/0选择3/2/1。
(2)与(1)相比,最高稀释度3根管均为阳性,但两个稀释度以后还存在阳性结果的,则要往后移一个稀释度。例如3/2/2/1/0条件下不能选3/2/2,因为后面还有阳性结果,因此要往后移一个梯度,选择2/2/1。
(3)与(2)相比,若顺延后选择的3个梯度以后仍然有阳性结果的,则后面的阳性管数需要加到前面计。例如3/2/2/1/1,按照(2)的规则是选择2/2/1,但由于后面还存在阳性结果,则需把之后的阳性结果并入前面,结果就是2/2/2。
(4)若最高的2个稀释度中仍然存在3管均为阳性的情况,则需选择最高的3个稀释度(出现这种结果通常是因为接种样品的稀释度不够),例如3/3/3/3/2选择3/3/2,3/3/3/3/0选择3/3/0。
(5)若所做的所有稀释度不存在3管均为阳性的情况,则需选择最低的3个稀释度(出现这种结果通常是样品含菌量低或稀释度过大),如2/1/0/0/0选择2/1/0,0/1/0/0/0选择0/1/0。
(6)与(5)相比,若选择的3个稀释度后面仍然有阳性结果,则需把后面的阳性结果加到前面,如2/1/0/1/0按照(5)应选择2/1/0,但后面仍有阳性结果,因此结果应为2/1/1。
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