铜绿假单胞菌的活化、保存和鉴定

一、铜绿假单胞菌简介

  铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）又名绿脓杆菌，好氧型革兰氏阴性杆菌，是一种条件致病菌，且对于多种抗生素具有耐药性，进入人体血液易引起败血症，严重时会导致死亡。大多数铜绿假单胞菌可产生蓝绿色的水溶性色绿脓菌素（脓青素）和黄绿色的荧光素（在365nm紫外灯下可看到菌落有荧光），部分菌株不产色素或由于环境的影响产色素不明显，也有少部分菌株不产色素及荧光，菌落呈红褐色。

二、铜绿假单胞菌的培养

  铜绿假单胞菌是严格需氧菌，因此培养环境要有充足的氧气。液体培养基可用TSB、NB、LB、BHI、SCDLP等常规培养基，静置培养时通常会在培养基表层形成菌膜，也可振荡培养。固体培养基可使用TSA、NA、PCA、LB、血平板等常规培养基，在30-37℃可快速生长，培养18-24h即可，若延长培养时间通常可观察到更明显的产色素现象。

三、铜绿假单胞菌的保存

  由于铜绿假单胞菌在4℃易发生自溶现象，因此一般不采用斜面冷藏保存法，可接种平板或斜面在室温条件下保存2-4周，或使用瓷珠保存法/甘油冷冻保存法/脱脂牛奶冷冻保存法，低温冷冻保存。相比较于其他肠杆菌科的细菌，铜绿假单胞菌在-20℃冷冻保存存活时间也相对较短，一般可保存6个月-1年。若需长期保存，则应在-70℃以下冷冻保存，或采用其他保存方法（如真空冷冻干燥法等）。

四、铜绿假单胞菌的鉴定

  可以参考GB8538或化妆品卫生规范方法标准进行鉴定。

  反应1：适用于产绿色色素的菌株（如CMCC10104，ATCC9027的标准菌株，产色素很强），大多数铜绿假单胞菌都可以用此方法确证。在溴化十六烷基三甲铵琼脂平板或CN琼脂平板上形成蓝绿色或黄绿色菌落，氧化酶试验阳性，接种绿脓菌素测定培养基反应为阳性，即可确认为铜绿假单胞菌。

  反应2：适用于产荧光不产素的菌株（如ATCC15442），此类菌株在溴化十六烷基三甲铵琼脂平板或CN平板上菌落无色或白色，但在366nm紫外灯下可见荧光，乙酰胺产氨和42℃生长试验均为阳性，也可判定为铜绿假单胞菌。

  反应3：在溴化十六烷基三甲铵琼脂平板或CN琼脂平板上为红褐色无荧光菌落，氧化酶、乙酰胺产氨及金氏B产荧光均为阳性反应，也为铜绿假单胞菌。

  反应4：对于氧化酶阳性，绿脓菌素阴性的菌株，也可以继续做硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验及42℃生长试验，均为阳性也可判定为铜绿假单胞菌。

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