枯草芽孢杆菌的活化、保存和鉴定

一、枯草芽孢杆菌简介

  枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为革兰氏阳性产芽孢杆菌，广泛存在于自然界土壤环境中，抗逆性较强，通常不致病，多数菌株为严格好氧型，有动力，可产生淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶等，该菌应用广泛、在食品、肥料、饲料、养殖、医药等行业有广泛应用。在微生物培养基检测领域，枯草芽孢杆菌常做为质控菌株使用，测试培养基的质量。由于其芽孢对某些抗生素非常敏感，因此也常用于某些抗生素的效价测定或抗生素的残留检测。

二、枯草芽孢杆菌的培养

  枯草芽孢杆菌是好氧型细菌，因此培养过程中需保证有充足的特性。枯草芽孢杆菌营养要求低，生长速度快，宜使用TSA、NA、LB琼脂等常规培养基平板进行活化，也可使用TSB或NB等液体培养基。由于其需氧的特性，在液体培养基中生长会在培养基表面形成菌膜，因此若使用液体培养基复苏时进行振荡培养可以更快的生长。枯草芽孢杆菌在NA平板上30-37℃培养12-18h即可观察到明显的菌落，早期菌落相对光滑湿润，继续培养后菌落会变得有明显褶皱，呈不规则状。若要观察芽孢，可在硫酸锰营养琼脂上培养5-7天，产生丰富的芽孢。

三、枯草芽孢杆菌的保存

  枯草芽孢杆菌在营养匮乏时可形成芽孢，存活时间很长，因此可使用斜面保藏法或半固体保存法，在2-8℃可存活3-6个月甚至更久。长期保存可采用瓷珠保存法、甘油保存法或脱脂牛奶冻存法均可，-20℃至少能保存一年一样，-70℃以下可保存数年甚至数十年。

四、枯草芽孢杆菌的鉴定

  可以参考《GB/T 26428-2010 饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测》方法标准进行鉴定，枯草芽孢杆菌在营养琼脂上菌落表面粗糙，不透明，灰白色或微黄色，革兰氏 染色为阳性杆菌，有芽孢，在7%氯化钠中生长，VP反应阳性，硝酸盐还原阳性，发酵甘露醇，丙酸盐阴性。

  与地衣芽孢杆菌的区分：枯草芽孢杆菌在厌氧环境通常不能生长，地衣芽孢杆菌可以生长。枯草芽孢杆菌不能利用丙酸盐，地衣芽孢杆菌可以利用丙酸盐。

  与蜡样芽胞杆菌的区分：枯草芽孢杆菌可发酵甘露醇、木糖和阿拉伯糖，卵黄反应为阴性，溶菌酶耐受通常为阴性，而蜡样芽胞杆菌不能发酵甘露醇、木糖和阿拉伯糖，卵黄反应及溶菌酶耐受为阳性。

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