HBI单增李斯特氏菌生化鉴定条的使用方法及结果判读

一、产品说明

  HBI单增李斯特氏菌生化鉴定条是参考GB4789.30标准制作，包含触酶试验（3%过氧化氢酶试验）、动力试验（SIM）、木糖、鼠李糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、七叶苷、MR、V-P共十项反应。进行最终判定时，需参照GB4789.30标准，并结合其他试验结果（革兰氏染色、溶血试验等）进行综合判定。

二、产品的使用

  （1）触酶（3%过氧化氢酶）试验：使用玻片法或直接接种法均可，挑取适量新鲜菌落至玻片上，滴加3%过氧化氢酶试剂，数秒内出现大量气泡即为阳性反应，也可使用玻璃或塑料材质接种物品挑取菌落至3%过氧化氢酶试剂内，数秒后观察现象。不可使用铁制品进行本试验，也不能使用血平板上的培养物，可能产生假阳性结果。

  （2）动力试验：使用接种针挑取平板上的新鲜培养物，穿刺接种至SIM生化管内，25-30℃培养48h，出现雾状生长或者沿穿刺线扩散生长即为动力阳性，仅在穿刺线上生长为动力阴性。

（  3）生化鉴定条：包含木糖、鼠李糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、七叶苷、MR、V-P共8项反应。挑取平板上的待测菌落至无菌生理盐水中，制成约109CFU/mL的菌悬液，每孔加入50-100μL的菌悬液，36±1℃培养24-48h。

  木糖/鼠李糖/麦芽糖/葡萄糖/甘露醇：接种后应逐日观察结果，出现变黄即为阳性反应，李斯特氏菌的糖发酵通常在24h内可观察到结果，生长慢可延长观察至48h。

  七叶苷：出现变黑即为阳性反应，李斯特氏菌通常在24h之内即可观察到明显的阳性结果。

  MR试验：培养结束后需滴加甲基红试剂观察结果，滴加甲基红试剂后数秒内显示为深红色即为MR阳性。部分李斯特氏菌甲基红反应较慢，可延长培养2-5天后再滴加甲基红试剂观察结果。

  V-P试验：培养结束后需滴加V-P试剂，静置30min-1h后观察，若出现明显的深红色即为V-P阳性，滴加试剂后静置最长不超过4h，4h内变红均为阳性结果。部分李斯特氏菌V-P反应较慢，需延长培养2-4天后再滴加V-P试剂观察结果。

三、单增李斯特氏菌的判定

  若反应为触酶+、动力+、木糖-、鼠李糖+、麦芽糖+、葡萄糖+、甘露醇-、七叶苷+、MR+、V-P+，且革兰氏染色、溶血试验结果符合GB4789.30标准，即可确认为单增李斯特氏菌。较低概率会遇到生化异常的菌株（如鼠李糖为-或其他个别反应不符），则需补充其他方法进行进一步确认（如PCR），超过两项生化不符通常可排除单增李斯特氏菌。

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