单增李斯特氏菌活化、保存及鉴定

一、单增李斯特氏菌简介

  单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）简称单增李斯特氏菌，革兰氏阳性无芽孢杆菌，有动力，能溶血，具有嗜冷特性，在4℃仍可生长和繁殖，是冷藏食品的主要致病菌之一，特别是对婴幼儿、孕妇、老人及其他免疫力低下的人群具有较强的致病性，因此在一些食品的检验及食品生产车间环境的检验非常严格。

二、单增李斯特氏菌的活化培养及保存

  单增李斯特氏菌对营养要求不高，易于培养，使用含蛋白胨或酵母浸粉的培养基即可生长良好，常用TSA/TSB、TSA-YE/TSB-YE、NA/NB、BHI、LB等培养基活化和培养，也可使用血平板。单增李斯特氏菌在在营养琼脂上培养18-24h菌落较小，通常为1-2mm，菌落为浅白色半透明状。

  常见的斜面保存法、半固体保存法、甘油冻存法、瓷珠保存法、脱脂牛奶保存法等方法均可用于单增李斯特氏菌的保存。短期保存可使用斜面保存法或半固体保存法，长期保存可使用瓷珠保存法、甘油冻存法或脱脂牛奶冷冻保存法，在-20℃或-70℃以下冷冻保存，温度越低保存期越长，一年以内可在-20℃保存，一年以上建议在-70℃以下保存。

三、单增李斯特氏菌的鉴定

  单增李斯特革兰氏染色为阳性杆菌，在Fraser培养基中过量生长能使培养基变黑，在Palcam琼脂平板上为灰绿色凹陷菌落，周围变为棕黑色，在李斯特氏菌显色平板上为蓝绿色菌落，周围有晕环。木糖、甘露醇发酵为阴性，葡萄糖、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷发酵为阳性，MR和V-P反应均为阳性，触酶阳性，溶血为阳性。

  与其他李斯特氏菌的区分：李斯特氏菌属均可分解七叶苷，除格氏李斯特氏菌能分解甘露醇外，其他李斯特氏菌通常不能分解甘露醇，因此在PALCAM平板上李斯特氏菌属的特征几乎相同难以区分，在李斯特显色培养基上都为蓝绿色菌落，但只有部分磷脂酶阳性的李斯特氏菌可产生晕环。英诺克李斯特氏菌溶血通常为阴性反应，在李斯特显色培养基上无晕环，其他特征与单增李斯特氏菌接近。由于部分单增李斯特氏菌溶血不明显、在李斯特显色平板上无晕环，与英诺克李斯特氏菌难以区分，因此可以补做协同溶血试验进一步进行确认，单增李斯特氏菌在接近金黄色葡萄球菌ATCC25923菌株生长出可呈现明显的溶血增强现象。

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