TTY-S-CEEM25双相培养基

【原理】

  多种或单种生物并存培养，对阿米巴病诊断有重要意义，但在生化定量分析和抗原提取方面的应用受到限制。1961年，Diamond用TTY S CEEM₂₅培养基首次建立了阿米巴原虫的无菌培养。该作者十分强调了鸡胚浸膏(CEEM₂₅)在无菌培养中的作用。此外，培养基的液体部分含有多种维生素107号混合液，这对无菌培养的建立亦至关重要。如其中的核黄素、烟酸等均是阿米巴原虫生长所必需的。实验表明：无菌培养中，若缺少半胱氨酸，则原虫会死亡，且死亡率随氧分压增高而增加。由于阿米巴原虫需在缺氧条件下增殖，由此推测半胱氨酸可能起还原剂作用。使氧化还原电位下降。也可能半胱氨酸中的巯基能保护该原虫避免或延迟氧的损伤。

【成分】

  TTY液：

【制法】

  (1)将1.6g琼脂加入80mITTY液中,混匀煮沸，分装4ml于16mmX125mm带盖试管中,121℃灭菌30分钟，贮存于冰箱中备用。

  (2)用前1星期，从冰箱取出上述培养基，加温融化，每管加入1ml灭活马血清，制成斜面。

  (3)配制斜面覆盖液：将TTY液用蒸馏水按1:4稀释，并加入琼脂，使琼脂浓度为0.05%，加此覆盖液于斜面培养管内，每管3.25ml。

  (4)用时取出培养基置室温中，加入1.5ml鸡胚浸膏和0.25ml维生素107液，此基为完全培养基，可用于培养。

【用途】

  用于阿米巴原虫的无菌培养。在建立无菌培养初期，每次接种的虫数需500000个滋养体，适应后可逐渐减少。转种时间，初期可在24至48小时转种1次，适应后改用72和96小时交替进行。无菌培养的温度范围为32~40℃，最适温度为35.5~37℃。清除接种物中细菌的方法：接种滋养体，可用青霉素G、链霉素和土霉素混合灭菌。接种包囊，可先用离心清洗法收集包囊，然后加盐酸至0.4%浓度，即可杀死细菌。但包囊在此盐酸液中不能超过10分钟，应及时清洗掉盐酸，再行接种。

【注意事项】

  1.加入斜面覆盖液的培养基，用前需置冰箱1星期，使斜面中营养成分充分渗到覆盖液中。

  2.低温冰箱中保存的维生素107液，若解冰后，溶液中出现絮状物，这说明配制时用了过多的NaOH，此液不宜再用。

  * 用双蒸水作1:4稀释，并加入0.05%量的琼脂。

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