【原理】
恶性疟原虫体外培养,需添加10%~15%量的人血清,这限制了某些方面的应用。Willet's等报道了在常规RPMI1640液中加入腺苷、不饱和18碳脂肪酸和牛血清蛋白,可取代加入人血清。疟原虫在此无血清培养基中可连续生长4周以上。各种脂肪酸对比培养结果表明:顺油酸、油酸和亚油酸效果最好。最佳油酸浓度为10-5M。
【成分及制法】
A液:
溶解混匀后,过滤除菌,分装50ml于无菌瓶中。
RPMI-1640
10.4g
HEPES缓冲粉
5.94g
牛白蛋白(去除脂肪酸)
6.0g
腺苷
10mg
双蒸水
1000ml
B液:脂肪酸贮存液
溶解后,用0.1NNaOH中和至pH7.2,并稀释至10ml。此液在-20℃可存一个月。
油酸
0.14m mol
乙烯醇
5.0ml
完全培养液:
A液
47.8ml
7.5℅碳酸氢钠
1.8ml
B液
0.36ml
庆大霉素(50mg/ml)
0.05ml
【用途】
用于恶性疟原虫体外培养。经此基培养的原虫形态正常,冷冻复苏后的原虫亦能迅速生长,但原虫繁殖率低于含血清培养基。该培养基可用于疟原虫营养需要和代谢等的研究。
【注意事项】
1.该培养基培养的原虫,其繁殖率较含血清培养基低,故该培养基不适用于常规培养,只用于特殊研究的培养。
2.培养的气体含量为:氧5%,二氧化碳5%,氮90%。每天换液,3~4天加血1次。
3.配成的B液可置-20℃冰箱保存,一般不超过1个月,故在做试验前应计算所需的量。
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