RPMI-1640培养基

【原理】

  1976年，Trager及Jensen二氏用RPMI-1640培养基首次建立了恶性疟原虫红内期的连续培养。该基系组织细胞培养基，用于疟原虫培养时，需添加25mM HEPES缓冲剂。因为疟原虫体外生长需有一个恒定的pH值环境，而原虫生长代谢时可产生大量的乳酸，可使培养物的pH值改变。HEPES系一种两性离子缓冲剂，可补充培养液中CO₂-NaH-CO₃缓冲系统的不足，增强缓冲能力。还可在疟原虫生长需较高CO₂浓度环境下保持培养物pH值的稳定。对疟原虫起始建株培养，还需有15%量的人AB型血清，待原虫适应体外生长后，血清含量可减少，一般为10%，其作用为支持原虫生长。

【成分】

【制法】

  将10.4g RPMI-1640粉用双蒸水彻底溶解，再加入5.94g HEPES粉，搅拌溶解，然后添加双蒸水到960ml。当天用二层微孔滤膜(孔径分别为0.22μm和0.8μm)过滤除菌。分装于100ml无菌盐水瓶内，每瓶96ml，置冰箱保存，存期为1个月左右。

  临用前，每96ml培养液中加入5%NaHCO₃4.2ml和人AB型血清10～15ml。此液可用于培养。为防止培养中出现的细菌污染，可加适量抗菌素。现常采用庆大霉素。青霉素G和链霉素已证明对原虫有抑制作用，应避免使用。

【用途】

  用于恶性疟原虫、诺氏猴疟原虫、巾帽猴疟原虫、豚尾猴疟原虫和食蟹猴疟原虫的培养。培养方法国内大多采用Trager等蜡烛缸方法。该法以25ml三角烧瓶为培养容器，内盛3ml培养物，培养物中红细胞压积为5%~10%，每天换液1次，每4天添加人红细胞。培养瓶置蜡烛缸内，点燃蜡烛，待灭时关闭缸盖，置37℃温箱中培养。但蜡烛缸法不适合于猪尾猴疟和伯氏疟原虫的培养。前者需用连续流灌法，而后者须用悬浮法才能建立连续培养。

【注意事项】

  1.5%NaHCO₃溶液需用双蒸水配制，无菌过滤，分装于安瓿保存。

  2.人血清宜选用AB型，无疟史者。分离的血清，须经无菌过滤，分装于无菌血清瓶内，每瓶15ml，保存于-20℃中备用。保存期一般不超过1年为宜。

  3.现市场上RPMI-1640培养粉有许多牌号和包装。其特点和用途各有不同，应注意选择。

  (1)RPMI-1640 №430-1800(GBICO):适用于建株培养和常规保种培养。

  (2)RPMI-1640 №078-5346(GIBCO):该基不含PABA和叶酸，可用于疟原虫叶酸生物合成的研究。

  (3)RPMI-1640 №074-1800(GIBCO) :由№430-1800改进而来，只含有0.5μg/LPABA和0.1μg/L的叶酸。这足以供原虫生长所需，但不会对抗抗叶酸剂和磺胺类药物的作用。可用于体外测定疟原虫对这类药物的敏感性。

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