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一、检验原理：
用途：用于水中大肠菌群滤膜法计数。
原理：酵母浸粉提供B族维生素；酸水解酪蛋白、蛋白胨及䏡胨提供氮源和碳源，维生素和矿物质；乳糖作为可发酵糖类；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾作为pH缓冲剂；氯化钠用于维持细胞渗透压；去氧胆酸盐和十二烷基硫酸钠能够抑制革兰氏阳性细菌的生长；加入95%的乙醇可以提高培养基的抑菌性；亚硫酸钠可以使碱性品红还原脱色；碱性品红为指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。发酵乳糖的细菌产生乙醛和酸，乙醛与亚硫酸钠和品红化合物结合变为紫红色，快速发酵乳糖的细菌使碱性品红结晶析出产生金属光泽。
二、培养基配方（g/L）：
|
酵母浸粉 |
1.2 |
|
酸水解酪蛋白 |
3.7 |
|
蛋白胨 |
3.7 |
|
䏡胨 |
7.5 |
|
乳糖 |
9.4 |
|
磷酸氢二钾 |
3.3 |
|
磷酸二氢钾 |
1.0 |
|
氯化钠 |
3.7 |
|
去氧胆酸盐 |
0.1 |
|
十二烷基硫酸钠 |
0.05 |
|
亚硫酸钠 |
1.6 |
|
碱性品红 |
0.8 |
|
琼脂 |
15.0 |
|
pH值7.2±0.2（25℃） |
|
三、试验方法：
1、称取本品51.0g，另取20 mL 95%的乙醇，加入980mL蒸馏水中搅拌加热溶解，分装，121℃高压灭菌15min，冷却至45℃-50℃左右时，倾入直径50mm-60mm的无菌平皿中备用。
2、10倍梯度稀释法制备质控菌株菌悬液，吸取适宜梯度的菌悬液接种于培养基和HB0177-8参比TSA培养基。
3、放置于36℃±1℃需氧培养24h ±2h，观察试验结果。
四、试验结果判断：
接种以下质控菌株，放置于36℃±1℃需氧培养24h ±2h。结果如图1。
|
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
生长情况 |
回收率 |
其他特征 |
|
大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
10-200 |
+++ |
≥70% |
紫红色菌落，有金属光泽 |
|
大肠埃希氏菌 |
ATCC 8739 |
10-200 |
+++ |
≥70% |
紫红色菌落，有金属光泽 |
|
弗氏柠檬酸杆菌 |
ATCC 43864 |
10-200 |
+++ |
≥70% |
紫红色菌落 |
|
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC 14028 |
10-200 |
+++ |
≥50% |
橙红色菌落 |
|
粪肠球菌 |
ATCC 29212 |
100-1000 |
- |
/ |
抑制 |
图1 Les Endo琼脂的微生物质控结果
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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
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