关于微生物培养基配制的一些注意事项

  微生物培养基作为微生物生长、繁殖和代谢的营养基质，其配制质量直接影响微生物实验和生产的成败。从原料选择到最终灭菌保存，每个环节都需严格把控。以下是配制微生物培养基时需要注意的一些事项。

一、原料选择与准备

1. 试剂质量要求

  选择纯度高、质量可靠的化学试剂和生物制剂。使用前应仔细查看说明文件或试剂标签，确认生产厂家、生产日期、保质期及配制方法等信息，避免使用状态不良的试剂或错误的配制方法。使用精度合适的天平进行称量，称量时需使用校准过的天平。对于微量成分，可采用逐级稀释的方法确保称量准确。称量过程中要注意防止试剂吸潮、氧化，特别是一些易变质的成分，如维生素、氨基酸等，称量后应立即密封保存。

2. 配制用水要求

  《GB4789.28-2024食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》对试验用水做了明确说明：试验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm（相当于电阻率≥0.04MΩ/cm）。试验用水的微生物污染不应超过10³CFU/mL，应按GB 4789.2定期检验微生物污染水平。培养基配制用水应采用蒸馏水、去离子水或者部分品牌的市售饮用纯净水。

图1 GB 4789.28-2024中对于试验用水要求的描述

3. 原料储存条件

  不同原料的储存条件各不相同。遇光易分解的试剂需避光保存；易潮解的试剂应密封防潮；热敏性试剂需低温冷藏。例如，维生素类试剂通常需要低温、避光保存，糖类物质应存放在干燥处，防止发霉变质。

二、配制过程

1. 溶解与混合

  将称量好的原料加入适量的水进行溶解。对于部分培养基，可适当加热并搅拌以加快溶解，但要注意控制加热温度和时间，避免破坏营养成分。培养基溶解过程可能会出现的问题与解决方法可参考《常见问题答疑（培养基配制、溶解）》。

2. 培养基pH值调节

  培养基pH是与试验结果直接相关的关键因素，由于微生物对环境pH较为敏感，pH值偏差可能导致微生物无法生长或生长不良。使用pH计或精密pH试纸准确测定并调节培养基的pH值，调节pH时应缓慢加入酸或碱溶液（酸或碱的种类可关注相应标准或遵循培养基厂家说明），边如酸或碱溶液后应充分搅拌，避免局部pH过高或过低。调节完成后，需再次测定pH值，确保其在目标范围内。

  目前，海博生物在售的大部分商品化脱水培养基已经预调了合适的pH，只需要加水溶解后灭菌即可使用。部分培养基因成分特性和其他因素影响，造成灭菌后的pH不在合理范围内，需要进行调整。

3. 分装与标记

  将配制好的培养基分装到合适的容器中，如培养皿、试管或三角瓶等。分装时要注意控制分装量，避免过多或过少。分装后，及时对容器进行标记，注明培养基名称、配制日期、配制人等信息，以便于后续使用和追溯。

三、灭菌处理要点

1. 灭菌方法选择

  根据培养基的成分和使用要求选择合适的灭菌方法和条件。常用的灭菌方式有过滤除菌、干热灭菌、湿热灭菌及辐照灭菌等。其中，湿热灭菌法又可分为四种方法：煮沸法、流动蒸汽灭菌法、间歇灭菌法和压力蒸汽灭菌法。通常来说，培养基最常用的是压力蒸汽灭菌法，灭菌时间和温度需严格控制，一般为121℃灭菌15分钟到20分钟。但对于一些热敏性物质，如某些维生素、氨基酸等，可采用过滤除菌的方式，避免高温破坏其活性。

  对于需要高压灭菌的培养基，应严格按照说明书灭菌程序进行灭菌，不应随意改动灭菌条件，否则可能导致灭菌不彻底、pH改变、颜色加深或者营养成分损失等问题，进而影响实验结果。对于需要煮沸的培养基，同样需要注意控制加热温度和时间，保证培养基充分溶解和灭菌效果。具体操作应遵照培养基使用说明或参考海博生物官网微生物知识模块的相关文章，如《培养基煮沸灭菌的操作要领》、《干粉培养基煮沸灭菌的操作方法及注意事项》等。

2. 灭菌操作规范

  在使用灭菌锅进行压力蒸汽灭菌时，应确保灭菌锅内冷空气排尽，否则会影响灭菌效果。灭菌结束后，不要立即打开锅盖，应等待压力自然降至零后，再缓慢打开锅盖，防止培养基因压力骤变而溢出或影响凝固效果。

四、安全与卫生注意事项

1. 操作环境要求

  培养基灭菌后的试验操作应在较为洁净的环境中进行，避免出现杂菌污染。可在超净工作台或无菌室内操作，使用前对环境进行清洁和消毒，如用75%乙醇擦拭台面，开启紫外灯照射30分钟以上等。

2. 个人防护措施

  进行微生物试验的操作人员需穿戴工作服、口罩和手套，严格遵守无菌操作规范，防止自身携带的微生物污染培养基。操作过程中，避免用手直接接触培养基，取用试剂时使用无菌工具。

3. 废弃物处理

  试验过程中产生的废弃物，如过期试剂、废弃培养基等，应按照相关规定进行处理，避免污染环境。特别是含有病原菌的培养基，需经过高压灭菌后再进行处理。

五、储存与使用注意事项

1. 储存条件

  培养基的储运条件会影响其使用性能，应根据培养基的特性选择合适的储存条件。一般来说，液体培养基可冷藏保存，固体培养基干粉可在室温下避光保存。配制后的固体培养基若不能立刻使用，可短暂存放于烘箱中保持的合适温度避免凝固，但需要注意保存时间不应超过一天。其它注意事项和信息可参考《培养基保存的注意事项》，具体产品的储存条件也可咨询相关的培养基厂家。

2. 使用管理

  为了规范培养基的使用和管理，可建立培养基使用台账，记录配制日期和保质期。超过保质期的培养基不得使用，使用前需检查培养基的外观，如颜色、凝固状态等，发现异常应立即停止使用。

  微生物培养基的配制是一项细致且严谨的工作，每一个环节都可能影响培养基的质量和微生物的生长。只有严格遵守上述注意事项，才能配制出高质量的培养基，为微生物实验和生产提供可靠保障。

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