培养基涂布出现菌落蔓延的原因

  涂布菌落蔓延是指在涂布法接种过程中，细菌菌落未形成单个分散的菌落，而是连成一片或大面积扩散的现象。可能的原因包括：

1. 涂布操作不当

  涂布不均匀：玻璃涂布棒（或无菌刮刀）未充分灼烧冷却，或涂布时用力不均，导致菌液未被均匀推开。

  涂布时间过长：菌液在平板表面停留时间过久，部分区域干燥前未涂匀，细菌随残留液体流动聚集。

  涂布棒污染：重复使用未灭菌的涂布棒或交叉污染。

2. 菌液问题

  菌液浓度过高：菌液过浓时，即使少量也会因涂布后细菌数量过多而重叠生长。

  菌液体积过大：通常涂布用量为100-200μL，过量会导致液体难以吸收，细菌随液体流动扩散。

  菌液未混匀：静置的菌液可能导致细菌沉淀，涂布时局部浓度过高。

3. 培养基问题

  平板过湿：冷凝水未干或培养基水分过多，菌液易流动，导致细菌蔓延。

  培养基成分：某些高营养培养基（如LB）可能促进细菌快速迁移（如运动性强的菌种）。

  琼脂浓度不足：琼脂含量低（<1.5%）时培养基偏软，细菌易扩散。

4. 细菌特性

  运动性强：某些细菌（如变形杆菌、沙门氏菌）具有鞭毛，在湿润培养基表面会游动形成迁徙状菌落。

  生物膜形成：部分细菌分泌胞外聚合物，导致菌落粘连成片。

5. 培养条件

  培养时间过长：菌落生长过度后可能融合。

  温度过高：加速细菌运动或繁殖，促进蔓延。

解决方法

1. 优化涂布操作：

  确保涂布棒灼烧后冷却，避免烫死细菌。

  快速轻柔涂布，避免反复来回涂抹。

2. 调整菌液：

  稀释菌液至合适浓度（通常涂布后可见单菌落）。

  涂布前混匀菌液，控制体积在100-200μL。

3. 处理培养基：

  倒板后静置干燥，吸收冷凝水。

  增加琼脂浓度（至1.5-2%）或使用低营养培养基（如R2A）抑制运动。

4. 抑制运动性细菌：

  添加0.1% TTC（氯化三苯基四氮唑）或0.01% SDS（十二烷基硫酸钠）限制迁移。

  对高度运动的菌种可改用倾注法替代涂布法。

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