糖发酵试验是鉴定细菌生化的重要试验之一,在不同的标准及文献中,配方也不完全相同。由于不同细菌生长条件存在差异,因此进行糖发酵试验时,需要选择不同的配方使用。
一、常见国标/SN标准配方
GB4789.4 |
GB4789.40 |
中国药典 |
SN标准 |
蛋白胨10.0g 牛肉浸粉5.0g 氯化钠3.0g 磷酸氢二钠2.0g 溴麝香草酚蓝0.025g 糖0.5%-1% pH:7.4±0.2 |
蛋白胨10.0g 氯化钠5.0g 酚红0.02g 糖0.5%-1% pH6.8±0.2 |
蛋白胨10.0g 氯化钠5.0g 酸性品红0.05g 或 溴麝香草酚蓝0.024g 糖0.5% pH:7.3±0.1 |
蛋白胨10.0g 牛肉浸粉3.0g 氯化钠5.0g 溴甲酚紫0.04g 糖0.5%-1% pH:7.0±0.1
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以上配方为常见细菌的糖发酵试验通用配方,虽然在不同标准中的配方略有差别,使用的酸碱指示剂有所不同,大多数菌在鉴定时使用以上四种配方效果差别不大,如大肠菌群、沙门氏菌、志贺氏菌、变形杆菌、大多数的芽孢菌、葡萄球菌、李斯特氏菌等均可使用。
以上配方中还可加入0.3%-0.5%的琼脂制成半固体状使用。溴甲酚紫的酸变色pH要低于溴麝香草酚蓝,对于一些产酸微弱的细菌糖发酵试验,使用溴麝香草酚蓝做为指示剂可能灵敏度会更高一些。
二、弧菌糖发酵试验配方
一些海洋弧菌和淡水的弧菌具有不同的嗜盐性,因此在做弧菌的糖发酵试验时,通常需要增加氯化钠的含量,更有利于菌的快速生长,如霍乱弧菌通常使用1%氯化钠的糖发酵管,副溶血性弧菌通常使用3%氯化钠的糖发酵管。
三、营养苛求型细菌的糖发酵试验
以上糖发酵试验的配方较为简单,营养较低,而一些链球菌、嗜血杆菌、螺杆菌等细菌无法在此培养基中良好生长,因此通常可以往基础配方中加入1%-2%的血清进行改进,可以适用于更多细菌的糖发酵试验。
四、军团菌的糖发酵试验
一些军团菌对氯化钠的抵抗力较弱,因此进行军团菌的糖发酵试验时通常去掉配方中的氯化钠,且需要补充半胱氨酸和微量的三价铁离子促进军团菌的生长。
五、双歧杆菌/乳酸菌专用糖发酵
成分
浓度g/L
蛋白胨
10.0
胰胨
5.0
吐温80
1.0
L-半胱氨酸
0.2
溴甲酚紫
0.0224
硫酸镁
0.2
硫酸亚铁
0.001
氯化钠
0.01
硫酸锰
0.0067
琼脂
1.5
糖
5
pH
7.1-7.3
双歧杆菌为严格厌氧菌,大多数乳酸菌为兼性厌氧菌,在普通的生化管中生长较差,因此通常使用特定配方的糖发酵管,内含有半胱氨酸和少量琼脂帮助维持厌氧环境,以及添加补充的微量元素,更有细菌的生长。一些其他的厌氧菌(如梭菌)和非厌氧菌也可使用此配方。
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