细菌CFU试验步骤及原理

一、细菌CFU

  CFU英文名称是Colony Forming Unit,中文是菌落形成单位。它表示的是一个或多个活的细菌细胞，在固体培养基上生长繁殖形成的、肉眼可见的菌落集群。一个CFU可能来自一个细菌，也可能来自一簇紧密在一起的细菌团。因此，CFU计数反映的是样品中具有繁殖能力的活菌数量，而不是全部细菌（包括死菌）的总数。

二、试验原理

  核心原理是：将待测样品进行一系列梯度稀释，然后取一定量的稀释液涂布在固体培养基平板上。经过适宜条件下的培养，每个活细菌都会生长形成一个菌落。通过统计平板上的菌落数，即可推算出原始样品中的活菌浓度。

  公式为： 原始样品中的菌落浓度 (CFU/mL 或 CFU/g) = 平板菌落数 × 稀释倍数 × (1 / 涂布体积mL)

三、实验步骤

  1、梯度稀释：取数支装有9mL无菌水的试管，依次标记为10⁻¹, 10⁻², 10⁻³, 10⁻⁴, 10⁻⁵, 10⁻⁶...（表示稀释倍数）。用移液器吸取1mL原始样品，加入9mL无菌水的试管中，涡旋混匀。此时试管中的样品被稀释了10倍，即10⁻¹稀释度。依此类推，进行多次10倍系列稀释，直到达到预期的稀释度（通常需要根据样品中细菌的预估浓度来决定，通常理想范围是30-300个/平板）。

  2、涂布平板：选择2-3个可能长出合适菌落数的稀释度（例如10⁻⁴, 10⁻⁵, 10⁻⁶）。用移液器从每个选定的稀释度试管中吸取0.1mL（100μL）菌液，分别加入到对应的无菌平板中央。立即用无菌涂布棒在平板表面轻轻地、均匀地涂开，让菌液均匀分布。等待几分钟让菌液被培养基吸收。

  3、培养：将涂布好的平板倒置放入恒温培养箱中（防止冷凝水滴落冲散菌落）。在适宜的温度（如37℃）下培养一定时间（通常18-24小时）。

  4、计数：取出平板，选择那些菌落数在30-300之间的平板进行计数。这个范围的统计结果被认为是最准确的。菌落太少会有较大误差，太多则会重叠无法区分。

四、注意事项

  1、无菌操作！ 整个实验过程必须在超净台中进行，防止空气中的杂菌污染平板，导致结果偏高。

  2、均匀混合： 每一步稀释后都要充分涡旋或振荡混匀，保证细菌分布均匀。

  3、选择合适的稀释度： 通常需要做多个稀释度，以确保至少有一个平板的菌落数落在30-300的可靠范围内。

  4、做好标记： 所有试管和平板都必须清晰标记稀释度和样品名称，避免混淆。

  5、菌落识别： 不同细菌的菌落形态（大小、颜色、形状、光泽等）可能不同，需注意区分目标菌落和杂菌。

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