菌落计数倾注法与涂布法差异

  在进行样品的菌落计数时，倾注法与涂布法是最常用的方法，适用于大多数含菌量一般或较多的样品中菌落计数。对于含菌量很低的样品，可以采用滤膜法或其他方法进行计数。由于操作方法上存在不同，在计数结果上也可能造成差异。

一、方法操作

  倾注法：将灭菌后的培养基冷却至46℃左右，先将样品液加入至无菌平皿内，再倒入约15-20ml的培养基轻轻摇晃，使培养基与样品液均匀混合，待完全凝固后再进行培养（若样品中可能存在蔓延菌，可在培养基凝固后，上方覆盖约5-10mL的培养基，减少菌落蔓延）。

  涂布法：将灭菌后的培养基倾入无菌平皿中，待培养基冷却后凝固成平板，在培养基表面涂布样品液，可借助涂布棒涂抹均匀，再进行培养。

二、差异分析

  1.接种体积：倾注法通常接种体积为1mL/皿，也可以控制接种体积在0.01-1mL之间，但接种体积过小不易混匀，涂布法通常接种体积为0.1mL/皿，也可以接种更小体积，一般不超过0.2mL/皿，部分标准中培养基涂布接种量为0.3-0.4mL，此时一般需特殊处理，将平皿预先干燥，否则容易糊成一片。从接种体积上可以看出，若样品中含菌量较少的情况下，需要接种更大体积的样品液才能得出更为准确的结果，倾注法更为适用。若样品中含菌量较多，稀释后再接种，则涂布法和倾注法均可。

  2.温度控制：涂布法不需要控制培养基的温度，制成平板后可以立刻涂布，而倾注法则需要较为准确的控制倾注时培养基的温度，若培养基温度过高则易导致微生物被烫死或减少，温度过低则容易产生凝块，不好操作。另外还有一些嗜冷的微生物对热较为敏感，使用倾注法得出的计数结果会显著低于涂布法。在使用测试片与倾注法对比时，有时也会出现类似的现象，因为测试片法与涂布法类似，不需要控制温度，不会导致微生物被烫死。

  3.菌落特征：涂布法接种的微生物生长在培养基的表面，除了可以计数以外，还可以很方便的观察菌落状态进行识别和鉴定，而倾注法接种的微生物生长在培养基的内部，不能观察到明显的菌落特征。

  4.蔓延菌：一些菌具有迁移或蔓延生长的特性，在培养基表面生长时会大面积蔓延或连成片，覆盖其他菌落，使用涂布法很难计数，使用倾注法则会大幅度减弱这种蔓延的特性，更容易计数。

  5.微生物种类：样品中可能存在需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌不同类型的微生物，涂布法接种的微生物在培养基表面生长，氧气充足，好氧微生物容易快速生长，而厌氧菌则不能生长，倾注法接种的微生物在培养基内部生长，相对氧气较少，好氧菌生长较差，而一些不太严格的厌氧菌甚至有可能生长，也会造成两种方法菌落计数存在差异。

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