大肠菌群培养基检测方法详解

  大肠菌群的检测是食品、饮用水卫生学检验中的关键指标，其核心原理就是利用不同培养基的特异性，来分离、筛选和鉴定这类细菌。

一、大肠菌群概述

  首先，我们需要明确“大肠菌群”的定义。它并非一个单一的菌种，而是一群在特定条件下能够发酵乳糖、产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。主要包括大肠埃希氏菌（E. coli）、克雷伯氏菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌等。

  检测大肠菌群的目的在于：

  1. 指示粪便污染：尤其是大肠埃希氏菌，是温血动物肠道中的常见菌，其存在提示样品可能受到粪便污染，并可能存在其他致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌）。

  2. 评价卫生质量：食品或饮用水中的大肠菌群数量越高，说明加工或处理过程的卫生条件越差。

二、主要培养基及其生长情况

  大肠菌群的检测通常分为两个或三个步骤：推测性试验（初发酵）、确定性试验（复发酵）和验证性试验。不同步骤使用不同的培养基。

1. 推测性试验培养基

  此阶段目的是初步判断样品中是否存在大肠菌群，主要观察其发酵乳糖产酸（pH变化）产气的能力。

  a) 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤

  原理：胰蛋白胨提供氮源和生长因子；乳糖是可发酵的碳水化合物；月桂基硫酸钠是抑菌剂，可抑制革兰氏阳性菌的生长。

生长情况与判断：

  阳性：培养基接种后，在35-37°C下培养24-48小时。如果试管内产气（杜氏小管内有气泡），则表明可能有大肠菌群存在。液体可能会变浑浊。

  阴性：无气体产生。

  特点：常用于饮用水和水源水的初步检测，是国际标准方法之一。

  b) 乳糖胆盐发酵管

  原理：蛋白胨提供营养；乳糖用于发酵；胆盐（或其它表面活性剂）是强选择剂，能强烈抑制革兰氏阳性菌和部分非肠道菌的生长。

  生长情况与判断：

  阳性：培养24-48小时后，产酸（使溴甲酚紫指示剂变黄）并产气。

  阴性：培养基颜色不变（仍为紫色），且无气体产生。

  特点：这是中国国家标准（GB）中用于食品大肠菌群MPN法检测的经典培养基，选择性较强。

2. 确定性试验与分离培养基

  此阶段目的是对推测阳性的菌株进行确认，并分离出纯菌落以便进一步鉴定。

  a) 伊红美蓝琼脂平板

  原理：这是一种鉴别性培养基。伊红和美蓝是染料，它们会与大肠菌群发酵乳糖产生的酸结合。结合结果：形成紫黑色或带金属光泽的菌落（尤其是大肠埃希氏菌的金属光泽非常典型）。胆盐：抑制革兰氏阳性菌。

  生长情况与判断：

  典型大肠菌群菌落：呈紫黑色、圆形、边缘光滑、表面湿润，可能带有绿色金属光泽。

  非发酵乳糖的细菌：形成无色或淡粉色菌落。

  特点：EMB平板是分离和初步鉴别肠道杆菌的经典培养基，金属光泽是E. coli的强指示特征。

  b) 麦康凯琼脂平板

  原理：同样是一种常用的鉴别培养基。胆盐：抑制非肠道细菌。乳糖和中性红指示剂：发酵乳糖产酸的细菌（大肠菌群）会使菌落呈红色或粉红色，并使周围的培养基也呈现红色。中性红在酸性条件下变红。

  生长情况与判断：

  典型大肠菌群菌落：砖红色或粉红色，菌落周围可能有胆盐沉淀导致的浑浊圈。

  非发酵乳糖的细菌：形成无色或淡黄色菌落。

  特点：选择性和鉴别性都很好，广泛应用于临床和食品微生物检验。

  c) 结晶紫中性红胆盐琼脂平板

  原理：结晶紫和胆盐：强烈抑制革兰氏阳性菌。乳糖和中性红：发酵乳糖的菌落为红色，并周围有胆盐沉淀环。

  生长情况与判断：

  典型大肠菌群菌落：紫红色，直径通常为0.5mm或更大，周围有沉淀环。

  特点：常用于食品中大肠菌群的平板计数法（GB标准）。

3. 验证性试验培养基

  此阶段目的是最终确认分离到的菌落是否确实具有大肠菌群的生化特性。

  a) 煌绿乳糖胆盐肉汤

  原理：这是复发酵试验的培养基。将EMB或VRBA上的典型菌落接种于此管。煌绿是一种抑菌剂，进一步加强选择性，排除一些非典型的细菌。

  生长情况与判断：

  阳性（最终确认）：在培养24-48小时内产气，即可确证为大肠菌群。

  阴性：不产气，则排除。

三、结论

  通过在不同培养基中的接力培养和观察，我们可以系统地检测和确认大肠菌群的存在与数量：

  1. 液体选择性培养基（如LST、乳糖胆盐）用于“捕猎”，初步筛选出可能的目标。

  2. 固体选择鉴别培养基（如EMB、Mac）用于“分离和辨认”，根据菌落颜色和形态挑出典型可疑菌落。

  3. 高选择性液体培养基（如BGLB）用于“最终裁决”，确认其生化特性。

  这种多步骤、多培养基的组合策略，确保了检测结果的准确性和可靠性，是微生物检验领域的经典范例。

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