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《GB/T13092-2025 饲料中霉菌总数测定》标准新版已经发布,相比较与上一版本,在测试方法、样品处理、培养基使用等多方面进行了改动。
一、稀释液
在2006版用使用的稀释液为0.85%的生理盐水,而2025版则可选择使用磷酸盐缓冲液或0.85%生理盐水,对于一些略微偏酸或偏碱性的样品,磷酸盐缓冲液具有一定的缓冲作用,维持pH在中性左右,此处使用的磷酸盐缓冲液配方浓度与GB4789食品标准相同,可以通用。
二、样品处理
在2006版中,需先将样品粉碎,再加入至稀释液中振荡30min;而在2025版标准中,对于非油脂类样品可采用均质方式处理1-2min或振荡30min,同时新增加了油脂类样品的处理方式,需先用无菌石蜡和吐温80在42±2℃振荡40min充分溶解,再加入磷酸盐缓冲液在42±2℃乳化1-2min。在这里选择42℃的温度处理,可在保证样品中的霉菌存活的同时,加快油脂的溶解和乳化过程。
三、计数培养基的变化
2006版使用的计数培养基为高盐察氏琼脂,而2025版则改为了氯硝胺孟加拉红氯霉素琼脂(DRBC)培养基。高盐察氏琼脂本身营养极低,除了蔗糖其他均为无机盐成分,霉菌生长缓慢,虽然杂菌生长较少,但部分霉菌的生长同样受到限制,在高盐察氏琼脂上生长率不高,或规定时间内不能充分生长,导致最终霉菌计数结果偏低。而DRBC琼脂的营养以有机物为主,培养基中含有的蛋白胨和葡萄糖可促使霉菌快速生长,氯硝胺和氯霉素主要能抑制细菌的生长,孟加拉红则能减弱霉菌的扩散,相比较与高盐察氏琼脂,霉菌在DRBC琼脂上可以生长更快,生长率更高,计数更准确。
四、培养条件
2006版由于使用的高盐察氏琼脂上霉菌生长较慢,采用的温度为(25-28)±1℃培养,第3天后开始逐日观察,持续到一周。而2025版使用的DRBC琼脂上霉菌生长较快,采用的培养温度为28±1℃,同样从第3天开始逐日观察,培养至第5天即可,缩短了培养周期,可以更快得到检测结果。
注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
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