细胞培养基的质量技术要求和检验方法分析

  细胞培养基作为体外细胞培养中细胞生长、增殖与代谢的主要营养来源，其质量直接决定细胞实验的重复性、可靠性及生物制品的安全性。以《中国药典》、《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T 3935-2007）行业标准和《细胞培养用无血清培养基标准》（T/SBIAORG 0002—2022）团体业标准为参考，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊要求，质量标准应包括外观、理化指标、微生物控制、生物学活性等关键项目。

一、细胞培养基质量标准

  常规的细胞培养基质量应符合表1所示的技术要求。

表1细胞培养基质量关键技术要求

  其它可能影响细胞培养基质量的技术要求：牛血清白蛋白残留量测定（中华人民共和国药典2025年版3411牛血清白蛋白残留量测定法）、抗生素残留量检查（中华人民共和国药典2025年版3408抗生素残留量检查法）、支原体检测（中华人民共和国药典2025年版3301支原体检查法）、残留溶剂测定（中华人民共和国药典2025年版0861残留溶剂测定法）、有效成分含量、粒度分布以及病毒控制（中华人民共和国药典2025年版0238生物制品病毒安全性控制）等。

二、细胞培养基质量技术要求和检验方法分析

1、外观与澄清度

  （1）外观采用目测法进行测定。

  （2）粉体产品的澄清度应按要求浓度配制成培养基溶液后，按澄清度检查法进行检查；液体产品的澄清度则直接按澄清度检查法进行检查。

  （3）粉体产品应颜色均一，无明显结块；液体产品应澄清透明，不分层，无悬浮物或沉淀。

2、理化指标

  针对粉体培养基，其表观参数为其按照配制说明配制成培养基溶液后的基本理化参数，包括溶液pH（初始）、渗透压摩尔浓度、澄清度。

  （1）pH（初始）：在25℃测量，培养基溶液的初始pH应在具体培养基标识均值的±0.3范围之内。

  （2）渗透压摩尔浓度：可通过渗透压摩尔浓度测定仪测定，培养基溶液渗透压摩尔浓度应在培养基标识均值±5%范围之内。

  （3）澄清度：培养基溶液应保持澄清（浊度不高于2 NTU）或几乎澄清（浊度不高于4 NTU）。

3、微生物指标

  微生物指标主要包括了细菌内毒素、支原体、微生物限度（需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数）（粉体培养基适用），无菌检查（液体培养基适用）。

  （1）细菌内毒素：采用鲎试剂进行检测，如无特殊要求，培养基产品细菌内毒素含量应不高于10 EU/mL。对粉体培养基而言，该指标为其配方浓度下溶液的细菌内毒素含量。

  （2）支原体检查：采用至少两种方法进行支原体检测（如培养法、DNA染色法或PCR法），应无支原体检出。

  （3）微生物限度（需氧菌总数）：粉体培养基中微生物需氧菌总数水平应不高于200 CFU/g。

  （4）微生物限度（霉菌及酵母菌总数）：粉体培养基中微生物霉菌及酵母菌总数水平应不高于50 CFU/g。

  （5）无菌检查：对液体培养基进行无菌检查（薄膜过滤法或直接接种法），应无菌生长。

4、生物学活性

  （1）细胞生长：选用标准细胞株（如HeLa、Vero细胞等）进行培养，检测细胞倍增时间（需与对照培养基一致，偏差≤10%）、贴壁率（贴壁细胞≥90%），细胞数（培养72 h细胞数量不低于1×10⁵cells/mL；继续维持48 h细胞数量不低于1×10⁵cells/mL）。其批次间波动范围应不超过±20%。

5、其它可能影响细胞培养基质量的指标

  （1）残留溶剂系指在产品的生产中，以及在其制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。如产品生产制造过程中涉及溶剂的使用，除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留限度应符合《中华人民共和国药典2025年版四部：0861残留溶剂测定法》附表中的规定。

  （2）培养基中碳源及氨基酸等主要有效成分含量应在具体培养基标识均值±10%范围之内。

  （3）粉体培养基粒度应均一，呈正态分布。建议以D90值描述粉体粒度，并控制批次间D90值（一个样品的累计粒度分布数达到90%时所对应的粒径）偏差不超过±20%。

三、良好的细胞培养基要求

  1、细胞培养基应无细胞毒性，不对细胞生长产生不良影响。

  2、细胞培养基应充分考虑外源因子污染风险，以避免污染应用端的细胞及其产品。

  3、细胞培养基中的组分应均一稳定，能够促进特定的细胞生长以及维持细胞生长状态或某种特定功能。

  4、细胞培养基在其规定的效期内，应保持质量稳定，功能性完整。

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