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1.缓冲盐体系(如磷酸盐、碳酸盐、HEPES、MOPS):
这是培养基抵抗pH变化的核心。缓冲盐的种类、浓度和比例直接决定了培养基的缓冲能力。pH值本身会影响缓冲盐的解离状态。如果初始pH配制不当或超出缓冲盐的有效缓冲范围(pKa附近),培养基将极易受到代谢产物(如酸或碱)或环境CO2的影响而发生pH漂移,导致培养条件失控。干粉状态时,某些缓冲盐成分(如碳酸盐)也可能因环境湿度(吸收CO2)而轻微影响其效能。
2.蛋白质、多肽类(如蛋白胨、胰蛋白胨、生长因子):
蛋白质和多肽具有特定的等电点(pI)。当培养基pH接近或达到其pI时,溶解性会显著降低,导致浑浊或沉淀析出,不仅损失营养,还可能堵塞滤器或影响细胞/微生物观察。极端pH(过高或过低)会加速蛋白质水解、变性或聚集失活,破坏其作为营养源或信号分子的功能。含有此类成分的培养基在配制、灭菌(高温高压可能暂时影响pH)和保存过程中需密切监控pH。
3.糖类(如葡萄糖、乳糖):
糖类本身在生理pH范围内相对稳定。然而,pH值会显著影响微生物或细胞对糖的代谢速率和途径。更重要的是,在灭菌(尤其是高温高压)过程中,培养基的pH环境会直接影响糖类的焦化反应和美拉德反应(与氨基酸反应)的程度。碱性条件下这些反应通常加剧,导致培养基颜色加深(褐变)、营养损耗并可能产生抑制性物质。因此,含糖培养基灭菌前的pH调节至关重要。
4.指示剂/染料(如酚红、中性红、溴甲酚紫):
这些成分的核心功能就是通过颜色变化指示pH。其显色范围(变色点)是固定的。如果培养基初始pH配制不准确,指示剂的颜色将不能正确反映预期的“中性”或目标状态,导致对培养环境判断失误。此外,某些染料(如中性红)在特定pH下的溶解度或稳定性也可能受到影响。
5.无机盐与金属离子(如铁盐、锌盐、镁盐、钙盐、磷酸盐):
pH值极大地影响多价金属离子(Fe³⁺, Ca²⁺, Mg²⁺, Zn²⁺等)的溶解度和生物可利用性。在接近中性或碱性pH下,这些离子极易与磷酸根、碳酸根或氢氧根离子形成不溶性沉淀(如磷酸钙、氢氧化铁),使其无法被微生物或细胞利用,造成关键微量元素缺乏。沉淀物也可能干扰观察或堵塞滤膜。配制时需注意加料顺序(如分别灭菌后添加、使用螯合剂)并严格控制pH以防止沉淀。
6.维生素(尤其是不稳定B族维生素如硫胺素、叶酸):
许多维生素在特定pH条件下化学稳定性较差。例如,某些维生素在酸性或碱性环境中更容易发生水解或氧化降解,导致其生物活性丧失。虽然光照和温度也是主要影响因素,但pH环境同样不可忽视,尤其在配制和保存溶液中。
7.抗生素:
很多抗生素的化学稳定性和生物活性高度依赖pH。例如:
β-内酰胺类(青霉素、氨苄青霉素): 在酸性条件下相对稳定,但在中性至碱性条件下易水解失活。8.琼脂(凝固剂):
虽然琼脂的凝固能力主要受浓度和温度影响,但极端pH(强酸或强碱)在高温下可能降解琼脂多糖,导致其凝固强度下降,培养基变软或无法凝固。
总结与建议:
•精确配制: 严格按照说明书要求,使用校准过的pH计,在适宜温度下(因温度影响pH测量)准确调节培养基灭菌前的pH值。
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