沙门氏菌分离培养基介绍

一、沙门氏菌简介

  沙门氏菌（Salmonella）由肠道沙门菌（S. enterica）与邦戈沙门菌（S. bongori）两个种属构成，为需氧菌或兼性厌氧菌，是一种常见的食源性致病菌。1885年沙门氏等在霍乱流行时分离到猪霍乱沙门氏菌，故定名为沙门氏菌属。尺寸介于0.6μm-1.0μm乘以2μm-4μm之间，通常不具备荚膜，且全无芽孢。沙门菌属细菌现有超过2500种血清型，其中仅少数如伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌能导致人类肠热症，对人类具有直接致病性，但对其他宿主则无此影响。

  沙门氏菌是人兽共患的肠道病原菌，在自然界中普遍存在，能导致诸如伤寒、副伤寒和食物中毒等多种疾病，对工农业以及畜牧业的发展产生直接冲击。沙门菌死亡后所释放的内毒素，能够诱发宿主出现体温升高、白细胞数量减少的现象，一旦毒素剂量过大，还会引发中毒反应甚至休克。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。在我国，其也是细菌性食物中毒的主要原因，对食品安全和公众健康构成严重威胁。因此，加强监测、规范食品卫生管理及提高公众防范意识是防控的关键。

二、沙门氏菌常用的分离培养基

1、SS琼脂

（1）检验原理

  䏡胨、牛肉浸粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖为可发酵的糖类；三号胆盐、枸橼酸钠和煌绿抑制革兰氏阳性菌及大多数的大肠菌群和变形杆菌，但不影响沙门氏菌的生长；硫代硫酸钠和枸橼酸铁用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；中性红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色；琼脂是培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

  称取本品63.53g，溶解于1000mL蒸馏水中，加热煮至沸，不必高压蒸气灭菌，冷至45℃-50℃，倾入无菌平皿，备用。

（3）沙门氏菌在SS琼脂上，36℃±1℃培养18h-24h，典型菌落特征为无色透明菌落有或无黑色中心。

图1 沙门氏菌在SS琼脂平板上的菌落特征

2、胆硫乳琼脂（DHL）

（1）检验原理

  蛋白胨、牛肉浸粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖、蔗糖为可发酵的糖类；柠檬酸钠抑制革兰氏阳性菌及大多数的大肠菌群和变形杆菌，但不影响沙门氏菌的生长；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；中性红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色；琼脂是培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

  称取本品65.2g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，待冷至50℃-55℃，倾入无菌平皿，无需高压灭菌。

（3）沙门氏菌在胆硫乳琼脂（DHL）上，37℃培养24h±2h，典型菌落特征为无色透明菌落有或无黑色中心。

图2 沙门氏菌在DHL平板上的菌落特征

3、亚利桑那菌琼脂（SA）

（1）检验原理

  蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；卫矛醇、蔗糖、葡萄糖为可发酵糖类，发酵糖产酸的菌落呈黄色；亚利桑那菌可利用丙二酸盐产碱；牛胆盐抑制革兰氏阳性菌，但不影响沙门氏菌的生长；硫代硫酸钠可以被某些细菌还原成硫化氢，与柠檬酸铁铵生成黑色硫化铁；琼脂是培养基的凝固剂；酚红为pH指示剂。

（2）产品配制方法

  称取本品88.5g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，加热溶解并不停搅拌，冷至50℃-55℃，倾入无菌平皿。无需高压灭菌。

（3）沙门氏菌在亚利桑那菌琼脂（SA）上，36℃±1℃培养18h-24h，典型菌落特征为粉红色菌落有或无黑色中心。

鼠伤寒沙门氏菌

图3 沙门氏菌在SA平板上的菌落特征

4、沙门氏菌显色培养基（第二代）（干粉）

（1）检验原理

  本产品是青岛海博生物技术有限公司改良的培养基，主要用于食品、水、牛奶、冰激凌、肉制品和其它样品中沙门氏菌的显色培养及快速检测。特殊营养物质提供微生物生长所需的碳氮源和微量元素，并维持均衡的渗透压；显色底物是由产色因子和微生物部分可代谢物质组成，在特异性酶作用下，游离出产色因子使菌落显示颜色。在沙门氏菌显色培养基上，沙门氏菌自身代谢产生的酶与相应显色底物反应使菌落显色，其菌落显紫色或紫红色；变形杆菌属、志贺氏菌属等不发酵乳糖的细菌菌落呈无色、白色或灰色；能发酵乳糖的大肠菌群菌落呈蓝色或蓝绿色。

（2）产品配制方法

  称取本品13.0g加入200mL蒸馏水中，加热煮沸溶解并不停搅拌，加热1-2分钟。冷却至45℃-50℃时，倾入无菌平皿。

注意：制备好的培养基一定要保持表面干燥，可在超净工作台中开盖吹15-30分钟。

（3）沙门氏菌在沙门氏菌显色培养基（第二代）上，36℃±1℃培养22h-24h，典型沙门氏菌显紫色，大肠杆菌和大肠菌群显蓝色，其他细菌显黄色或无色。

图4 沙门氏菌在SS琼脂平板上的菌落特征

5、HE琼脂（GB4789.4-2024标准）

（1）检验原理

  酵母浸粉为细菌生长提供维生素和辅助因子，木糖、乳糖和蔗糖作为可发酵碳源。除志贺氏菌外，其他大多数肠杆菌均发酵木糖，加入赖氨酸是为了鉴别沙门氏菌。沙门氏菌发酵木糖产酸，形成的酸性环境有利于该菌产生脱羧酶，沙门氏菌使赖氨酸脱羧，从而使培养基的pH升高向碱性转变，但这种转变可因其他菌发酵乳糖和蔗糖产生大量的酸而被阻止。在碱性的条件下，硫代硫酸钠及柠檬酸铁铵与沙门氏菌产生的硫化氢反应，使得菌落的颜色呈黑色；但当酸性条件下时，这种反应被抑制。苯酚红作为酸碱指示剂，氯化钠维持体系渗透压平衡，去氧胆酸盐抑制革兰氏阳性菌的生长。

（2）产品配制方法

  称取本品57.0g，加热煮沸搅拌溶解于1000mL蒸馏水中，勿过度加热，勿高压灭菌。冷至48℃±2℃时，倾入无菌平皿，部分开盖，干燥后盖上，备用。

（3）沙门氏菌在HE琼脂上，36℃±1℃培养18h-24h，典型菌落特征为无色透明菌落有或无黑色中心。

图5 沙门氏菌在HE琼脂平板上的菌落特征

6、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂（GB4789.4-2024标准）

（1）检验原理

  酵母浸粉为细菌生长提供维生素和辅助因子，木糖、乳糖和蔗糖作为可发酵碳源。除志贺氏菌外，其他大多数肠杆菌均发酵木糖，加入赖氨酸是为了鉴别沙门氏菌。沙门氏菌发酵木糖产酸，形成的酸性环境有利于该菌产生脱羧酶，沙门氏菌使赖氨酸脱羧，从而使培养基的pH升高向碱性转变，但这种转变可因其他菌发酵乳糖和蔗糖产生大量的酸而被阻止。在碱性的条件下，硫代硫酸钠及柠檬酸铁铵与沙门氏菌产生的硫化氢反应，使得菌落的颜色呈黑色；但当酸性条件下时，这种反应被抑制。苯酚红作为酸碱指示剂，氯化钠维持体系渗透压平衡，去氧胆酸盐抑制革兰氏阳性菌的生长。

（2）产品配制方法

  称取本品57.0g，加热煮沸搅拌溶解于1000mL蒸馏水中，勿过度加热，勿高压灭菌。冷至48℃±2℃时，倾入无菌平皿，部分开盖，干燥后盖上，备用。

（3）沙门氏菌在木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂上，36℃±1℃培养18h-24h，典型菌落特征为无色透明菌落有或无黑色中心。

图6 沙门氏菌在XLD琼脂平板上的菌落特征

7、亚硫酸铋（BS）琼脂（GB4789.4-2024标准）

（1）检验原理

  蛋白胨、牛肉粉在培养基中作为基础营养物质，为细菌生长提供所需的氮源、碳源、维生素及一些矿物质等元素；葡萄糖可作为细菌生长代谢所需的能量物质；磷酸盐对培养环境pH值起到缓冲作用。煌绿和亚硫酸钠能抑制大肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的生长，但对伤寒、副伤寒等沙门氏菌的生长没有影响。伤寒沙门氏菌及其他沙门氏菌能利用葡萄糖，将亚硫酸盐还原成硫化物并与硫酸亚铁反应使得菌落呈黑色，此外还可把铋离子还原成金属铋，使菌落呈现金属光泽，从而使沙门氏菌得到分离。

（2）产品配制方法

  称取本品50.3g，加入1000mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷至48℃±2℃，摇匀，倾入无菌平皿备用。勿过度加热，无需高压灭菌。保存于黑暗处48h内使用。

  注：培养基中的柠檬酸铋铵和亚硫酸钠反应生成不溶物，培养基呈浑浊状，有黑色沉淀，摇匀后倒平板使用即可。

（3）沙门氏菌在亚硫酸铋琼脂（BS）上36℃±1℃需氧培养40h-48h，典型菌落特征为灰绿色菌落，有或无金属光泽。

图7 沙门氏菌在BS琼脂平板上的菌落特征

8、WS琼脂

（1）检验原理

  䏡蛋白胨、牛肉膏提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖、蔗糖为可发酵的糖类；十二烷基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌；氯化钠维持均衡的渗透压；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；琼脂是培养基的凝固剂；溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈橙黄色，不发酵糖的菌落为蓝绿色。

（2）产品配制方法

  称取本品65.76g，加热煮沸溶解于1000mL蒸馏水中，倾入无菌平皿。无需高压灭菌。

（3）沙门氏菌在WS琼脂上，36℃±1℃培养18h-24h，典型菌落特征为无色透明菌落有或无黑色中心。

图8 沙门氏菌在WS琼脂平板上的菌落特征

a：肠炎沙门氏菌，b：鼠伤寒沙门氏菌

9、煌绿琼脂

（1）检验原理

  胰酪蛋白胨、蛋白胨、酵母浸粉提供碳源和氮源；氯化钠维持均衡的渗透压；乳糖、蔗糖为可发酵的糖类；苯酚红指示剂在pH 6.8时呈黄色，pH 8.1呈粉红色，发酵糖产酸的菌落呈黄色，不发酵糖的菌落为红色；亮绿抑制革兰氏阳性菌和大多数非沙门氏菌的革兰氏阴性杆菌，通常抑制发酵乳糖、蔗糖的细菌；琼脂是培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

  称取本品58.0g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，冷至50℃左右，倾入无菌平皿。本培养基当天使用。

（3）沙门氏菌在煌绿琼脂上，36℃±1℃培养18h-24h，典型菌落特征为粉红色菌落，培养基变红。

图9 沙门氏菌在煌绿琼脂平板上的菌落特征

10、BPLS琼脂

（1）检验原理

  䏡蛋白胨、酪蛋白胨、酵母粉为微生物的生长提供碳源、氮源、维生素和生长因子，满足细菌生长的需求；氯化钠维护微生物细胞的渗透压；乳糖和蔗糖为可发酵的糖类；苯酚红和灿烂绿为酸碱指示剂，苯酚红pH 6.8（黄）-8.0（红），灿烂绿pH 0.0（黄）-2.6（绿）；琼脂是培养基的凝固剂。典型的沙门氏菌不发酵乳糖和蔗糖，利用培养基中的蛋白胨产碱，使培养基变红。

（2）产品配制方法

  称取本品51.0g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15min，冷至45℃-50℃时，倾入无菌平皿。

（3）沙门氏菌在BPLS琼脂上，36℃±1℃培养18h-72h，典型菌落特征为红色菌落，周围培养基变红。

图10 沙门氏菌在BPLS琼脂平板上的菌落特征

11、MLCB寒天培地培养基

（1）检验原理

  酵母浸粉、蛋白胨和牛心浸粉提供微生物生长所需的碳源和氮源；氯化钠用于维持均衡的渗透压，甘露醇作为可发酵的糖类被沙门氏菌利用产酸；沙门氏菌产生的脱羧酶与L-赖氨酸盐酸盐反应生成碱性物质；在碱性条件下，硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵与沙门氏菌产生的硫化氢反应使得菌落的颜色呈现黑色；煌绿和结晶紫可抑制大肠杆菌等革兰氏阳性菌的生长；琼脂起凝固的作用。

（2）产品配制方法

  称取本品49.0g，加热煮沸溶解于1000mL蒸馏水中，冷至50℃-55℃时，倾入无菌平皿，备用。

（3）沙门氏菌在MLCB寒天培地培养基上，36℃±1℃培养18h-24h，典型菌落特征为黑色中心菌落。

图11 沙门氏菌在MLCB寒天培地平板上的菌落特征

三、产品展示

  我公司有多种沙门氏菌检测的培养基，客户可根据实际应用情况和用途进行选用。

表1 部分产品信息

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

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