培养污染细胞的支原体培养基

【成分】

【制法】

  1.马丁氏消化液：取猪胃（包括内壁粘膜）300~350g，40℃蒸馏水1000ml,盐酸(C.P比重1.19)。先将新鲜猪胃，用自来水轻轻洗除胃内污物，用刀切成长条状，放入绞肉机内绞2次。按以上成分，混和均匀，放入37~40℃水温箱内消化16~18小时，在前10小时内每小时充分搅拌1次，以后每两小时搅拌1次。消化完毕，煮沸，放入灭菌瓶内澄清，次日，虹吸上清液。如需储存,在磨口瓶内加入氯仿及甲苯，塞紧,放入冷库备用。

  2.马丁氏肉浸液:取新鲜牛肉1000g，去筋、脂肪，切成条状，放入绞肉机内绞2次。加蒸馏水2000ml，充分混匀，放入，4~10℃冰箱内，浸泡18~20小时，倒入搪瓷蒸气锅内加热，不断搅拌，使温度逐渐上升，煮沸1小时，再加蒸馏水补充至原量，用细布过滤。滤液分装瓶内，121℃灭菌30分钟备用。

  3.0.3~0.4%半固体马丁氏琼脂管:虹吸马丁氏消化液，微温加热，用5N氢氧化钠调整至pH7.0~7.2,煮沸，用滤纸过滤，与等量无沉淀的马丁氏肉浸液混和，加入氯化钠，再用5N氢氧化钠调整至pH8.2~8.3，加入琼脂粉。108℃灭菌30分钟，使熔化，趁热，用细滤纸过滤至透明，按每1000ml加葡萄糖1g,此时 pH 应为 8.0~8.1。

  4.1.4%固体马丁氏琼脂平皿：制法同上述，只需将琼脂粉量改为14g。

  5.以上两类培养基分装于70ml瓶，121℃灭菌15分钟后，备用。用前煮沸熔化，待至60~70℃，加入预温于37℃中的无菌马血清20ml，无菌新鲜酵母浸出液10ml，充分混和后，半固体培养基分装在灭菌试管内，每管7ml。固体培养基可直接倾注灭菌平皿上。

【用途】

  用于检测菌、疫苗或污染组织细胞培养中的支原体。

【注意事项】

  支原体在半固体管中生长时，可出现降落伞状物生长，悬于试管中。平皿上生长的支原体菌落，在低倍显微镜下才能观察到。加马血清时，应严格无菌操作。

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