高压蒸汽灭菌生物指示剂的生产要求、检测项目和检测要求

一、引言

  高压蒸汽灭菌生物指示剂（Biological Indicator，BI）是验证灭菌效果的核心耗材，其质量直接决定灭菌验证结果的可靠性。为保障产品性能稳定、检测精准，国内外均出台严格标准（如ISO 11138、中国药典），对其生产流程、质量检测项目及指标作出明确规范。本文围绕相关要求展开综述，为行业生产与质量管控提供参考。

二、高压蒸汽灭菌生物指示剂的生产要求

  高压蒸汽灭菌生物指示剂的生产需遵循无菌化、标准化、稳定性三大核心原则，涵盖菌株筛选、载体制备、菌剂负载、成品封装等关键环节。

1、菌株与菌液制备要求

  生产用指示菌需为嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilusATCC 7953），该菌株需具备稳定的耐热抗力，且无杂菌污染。菌株传代次数需严格控制，避免因多次传代导致D值下降；复苏培养需采用标准培养基，确保芽孢萌发率≥99%。菌液制备时，需通过离心、洗涤去除营养体细胞，仅保留成熟芽孢；芽孢混悬液浓度需精准调控至1×10⁵ CFU ~5×10⁶ CFU/载体，且菌液需经无菌性检测，确保无外源微生物污染。

2、载体与负载工艺要求

  载体材质需满足耐高温、不吸附芽孢、化学惰性的特点，常用载体包括滤纸、玻璃纤维片、聚四氟乙烯片等。载体需经预处理：清洗去除杂质后，经121℃高压蒸汽灭菌30 min，或160℃干热灭菌2 h，确保载体本身无菌。芽孢负载需采用定量涂布工艺，使芽孢均匀分布于载体表面，避免局部浓度过高或过低；负载后需在37℃~40℃无菌环境下干燥，干燥过程需控制湿度与时间，防止芽孢失活。

3、成品封装与环境要求

  自含式生物指示剂的封装需在100级洁净区内进行，确保封装过程无污染。培养基与菌片需隔离包装（如内置玻璃管），包装材料需为耐高温的塑料或金属，且密封性能良好，防止运输与储存过程中受潮、污染。生产环境需满足GMP相关要求，车间需定期进行沉降菌、浮游菌检测，操作人员需穿戴无菌防护服，严格执行无菌操作规范。

4、储存与运输要求

  成品需在2℃～8℃避光储存，避免高温、光照导致芽孢抗力下降；运输过程需采用冷链物流，温度波动范围需控制在±2℃以内。产品保质期需通过稳定性试验验证，保质期内芽孢含菌量下降率不得超过10%，D值变化幅度需≤±0.2 min。

三、高压蒸汽灭菌生物指示剂的检测项目和要求

  生物指示剂的质量检测分为出厂检测与型式检测，涵盖含菌量、抗力特性、无菌性、适用性等核心项目，各项指标需符合国家标准方可上市。

1、含菌量检测

  含菌量是生物指示剂的基础指标，检测方法为平板涂布计数法。取10片菌片，分别加入无菌生理盐水，振荡洗脱芽孢；洗脱液经梯度稀释后，涂布于营养琼脂培养基，37℃培养24 h～48 h，计数菌落数。单载体含菌量需在1×10⁵ CFU～5×10⁶ CFU范围内。

2、抗力特性检测

  抗力特性是生物指示剂的核心指标，直接决定灭菌挑战能力，包括D值检测与存活/杀灭时间检测。D值检测采用存活曲线法：将菌片置于121℃饱和蒸汽中，分别在不同时间点取样，计算存活芽孢数；以灭菌时间为横坐标，存活菌数对数为纵坐标绘制曲线，斜率绝对值的倒数即为D值。121℃下，嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的D值需为≥1.5 min。存活/杀灭时间检测要求：121℃下，菌片需能存活≥4.5 min，且在≤13.5 min内被完全杀灭，确保在常规灭菌参数（121℃灭菌15 min）下，既能挑战灭菌效果，又能被彻底灭活。

3、无菌性与适用性检测

  无菌性检测针对载体与培养基：取20片未灭菌菌片的载体，加入无菌培养基培养，需无任何微生物生长；培养基需进行适用性试验，确保芽孢复苏后能正常代谢产酸，使pH指示剂（如溴甲酚紫）变色明显，且培养基无浑浊、沉淀等异常。此外，成品需进行模拟灭菌试验：将生物指示剂置于灭菌器最难灭菌位置，经121℃ 15 min灭菌后，培养无芽孢生长，证明产品能有效验证灭菌效果。

4、稳定性检测

  稳定性检测包括加速稳定性与长期稳定性试验。加速稳定性试验将产品置于37℃储存，定期检测含菌量与D值，推算产品保质期；长期稳定性试验则在2℃～8℃条件下储存，每6个月取样检测，确保保质期内产品性能无显著变化。同时，需进行运输稳定性试验，模拟极端运输条件后，产品各项指标需仍符合标准要求。

四、结语

  高压蒸汽灭菌生物指示剂的生产与检测是保障产品质量的关键环节，严格的生产规范与全面的质量检测，是确保灭菌验证结果准确可靠的前提。随着医疗、制药行业对无菌要求的不断提高，生物指示剂的生产需向智能化、精准化方向发展，同时需加强对快速型、智能化生物指示剂的研发，以满足不同场景的灭菌验证需求。未来，行业需进一步完善质量标准，推动国产生物指示剂实现高端化替代，为无菌保障体系提供更坚实的支撑。

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

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