固体培养基(1.4%PPLO琼脂)

【成分】

【制法】

1.牛心消化液配制：

  取去脂绞碎牛心250g,氯化钠5g及蒸馏水900ml混和。另取胰蛋白酶2.5g，溶解于100ml。0.5%氢化钠溶液中，然后与上述牛心混和，放置50~60℃水温箱内消化2小时，中间不断搅拌，消化后用两层纱布过滤，滤液煮沸5分钟,用滤纸过滤后，并补足水分至原量，然后加酵母浸膏1g,混匀,冷却后,调整至pH8.0。分装，121℃灭菌15分钟，备用。

2.支原体基础琼脂：

  取上述牛心消化液（已加氯化钠）1000ml，加蛋白胨10g和琼脂粉14g，混和后，加热溶解，调整至pH7.8~8.0,再加热煮沸,用脱脂棉或绒布过滤，过滤后分装于圆瓶中，每瓶70ml,121℃灭菌15分钟，备用。

3.25%鲜酵母浸出液制备：

  市售食用鲜酵母块250g，加蒸馏水1000ml,混和后，煮沸2分钟，用滤纸过滤，滤后置4℃冰箱中过夜，使之沉淀，次日吸取上清液，用15%氢氧化钠溶液，调整至pH8.0，再煮沸1次，冷却后，3000转/分离心 45分钟,吸取上清液，分装于瓶中,121℃灭菌15分钟，放4℃冰箱中，备用。可保存3个月。

4.倾注平皿前：

  溶解基础琼脂，冷却至80℃左右，以无菌手续，每瓶内立即加预温在37℃培养箱内的无菌马血清或小牛血清20ml，1%乙酸铊溶液2.5ml，青霉素“G”钾盐溶液（20万u/ml)0.5ml和两性霉素B溶液（5mg/ml)0.1ml，充分混和后，倒入9cm平皿，经37℃培养过夜，无菌试验阴性者，存放4℃冰箱备用。

【用途】

  分离支原体。

【注意事项】

  1.乙酸铊是极毒的药品，须特别注意安全操作。

  2.支原体(PPLO)美蓝琼脂平皿为分离肺炎支原体的选择性平皿，口腔、唾液分泌物中的其它支原体均被抑制生长，肺炎支原体生长为“桑椹状”无色的菌落。

  3.支原体（PPLO)传代、移种用0.1%半固体琼脂：除琼脂粉用0.1%外，其它成分和支原体相同，但不加两性霉素，此半固体琼脂，分装在试管内灭菌备用，传代时将平皿上已选定的支原体菌落，用无菌刀片切下一小块，直接移种于半固体管中，置适宜的气体环境中，培养3～5天后，可在琼脂小块出现“小岛状”絮片生长物，或呈颗粒状，即次代支原体。

  4.支原体（PPLO)传代用液体培养基：其成分与上述支原体琼脂相同，不加琼脂粉和两性霉素B。

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