嗜肺军团菌的生化试验和结果判读

  嗜肺军团菌是引起人类军团病的病原体，是一类革兰阴性杆菌。1976年7月，美国军团宾夕法尼亚州分团在费城召开年会期间，爆发了一种不明原因的肺炎流行，后从死亡者肺组织中分离出一种新的革兰阴性杆菌。1978年，该菌被正式定名为嗜肺军团菌。嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）两端钝圆，有鞭毛，无芽孢和荚膜的革兰氏阴性杆菌，具有在含有L-半胱氨酸和三价铁盐缓冲液的活性炭-酵母提取液培养基上生长的特性，经生化试验和血清学试验鉴定确认的一种具有致病性的军团菌，是引起军团菌病的主要菌型。

  嗜肺军团菌广泛存在于天然淡水、湿润土壤等自然环境中，随着供水进入空调冷却塔、用水管路、水箱等人工水环境中，若管道长时间水流缓慢甚至停滞，反复循环使用，长期未清洗、消毒或消毒不彻底，则导致嗜肺军团菌大量生长繁殖，从而污染空调冷却水、冷凝水，沐浴用水等人工用水。气溶胶是嗜肺军团菌主要的传播途径，在冷热水系统、温泉水、花洒、喷泉和储水箱、空调冷却塔水、冷凝水等处的嗜肺军团菌，会以气溶胶的形式散布到空气里，再通过呼吸道感染人类。感染后潜伏期一般为2-10天，最短可达5小时，出现乏力、头痛、胸痛、肌肉痛，咳嗽或轻度干咳，呼吸困难等症状，发热可达40℃以上。有的患者有恶心、呕吐及腹泻等症状。体温多于8-10天下降，症状逐渐好转。至今尚无嗜肺军团菌疫苗。

  《GB/T 18204.5-2025公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统》标准中有嗜肺军团菌的检验方法。其中嗜肺军团菌的鉴定参考《GB/T 18204.3-2025公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物指标》中嗜肺军团菌的生化实验鉴定方法。

一、生化鉴定

1、革兰氏染色

  嗜肺军团菌为革兰氏阴性杆菌，如图1所示。

图1 嗜肺军团菌ATCC 33152革兰氏染色结果

2、氧化酶试验

  用无菌水将氧化酶试纸浸湿，用玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落涂在试纸上。如果在30 s内出现紫罗兰色或深蓝色为阳性；2 min不变色为阴性。嗜肺军团菌为氧化酶阴性或弱阳性。结果如图2所示。

图2 嗜肺军团菌ATCC 33152氧化酶试验结果

3、硝酸盐还原试验

  将菌接种到硝酸盐肉汤培养基中，于36℃±1℃培养1 d~3 d，加入甲液和乙液各2-3滴，观察结果。立刻或数分钟内显红色为阳性；培养基颜色无变化继续加入少量锌粉，如仍不变红，则也为阳性，如变红，则为阴性。嗜肺军团菌为硝酸盐还原阴性。结果如图3所示。

图3 嗜肺军团菌ATCC 33152硝酸盐还原试验结果

注：左侧为空白对照，中间为滴加试剂后，右侧为加入锌粉后

4、尿素酶试验

  将菌以较大量接种到军团菌尿素酶生化管中，于36℃±1℃培养2 h、24 h，分别观察结果。培养基变为红色为阳性，颜色不变为阴性。嗜肺军团菌尿素酶为阴性。结果如图4所示。

图4 嗜肺军团菌ATCC 33152尿素酶试验结果

注：左侧为空白对照

5、明胶液化试验

  将菌穿刺接种在明胶培养基内，于36℃±1℃培养24 h±2 h，取出放置于4℃±2℃冰箱内10 min~30 min后再观察结果。仍呈溶解状或表面溶解时即为明胶液化试验阳性，凝固不溶者为阴性。嗜肺军团菌明胶液化为阳性。结果如图5所示。

图5 嗜肺军团菌ATCC 33152明胶液化试验结果

6、马尿酸水解试验

  挑取大量菌落，加到军团菌的马尿酸钠生化管中。混合均匀后于36℃±1℃水浴中温育或36℃±1℃培养箱中培养24 h。沿着管壁缓缓加入0.2 mL茚三酮溶液，于36℃±1℃水浴中温育或36℃±1℃培养箱中放置10 min后观察结果。15 min内溶液出现蓝紫色变化则为阳性，溶液无颜色变化或15 min之后出现蓝紫色变化为阴性。嗜肺军团菌水解马尿酸为阳性。结果如图6所示。

图6 嗜肺军团菌ATCC 33152马尿酸钠试验结果

注：左侧为空白对照，中间为培养结束后，右侧为加入茚三酮后

  注意事项：此试验需用新鲜的菌，接种时需挑取大量菌体（接种环一满环），若接种量太少可能会出现假阴性；1%马尿酸钠生化鉴定管应放置与-20℃保存；茚三酮溶液最好现配现用，如需保存，可在避光冷藏条件下保存不超过7 d。

二、产品展示

  上述用到的鉴定嗜肺军团菌的产品主要有：

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

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