甲醛化致敏红细胞

【成分】

【制法】

  1.钩端螺旋体红细胞致敏物质(ESS)提取方法：取钩端螺旋体5~7天的培养物，经暗视野显微镜检查，每视野（400倍）在100条以上者，加入最终浓度0.2%(甲醛)杀菌，以高速6000转/分离心30分钟集菌。然后加等量甲液(氢化钠0. 52g,枸橼酸钠5.88g,去氧胆酸钠0.4g,蒸馏水100ml,)充分摇匀，室温或4℃冰箱放置24小时以上，再加入甲液1/2量的乙液(氯仿4份加正戊醇1份）、放4℃冰箱3~5天。取出，4000转/分离心20分钟，吸取上清液（水溶层，即为ESS）置于透析袋中，用蒸馏水在4℃冰箱中透析24小时，取出，加防腐剂分装或冰冻干燥保存备用。

  2.ESS的滴度测定：取等量的醛化红细胞与不同量的ESS混合于试管中，置37℃孵箱致敏2小时，离心沉淀，去上清，沉淀的红细胞用生理盐水洗涤3次，然后用pH7.4硼砂-琥珀酸缓冲液配制成2.5%的致敏红细胞悬液，与钩端螺旋体标准免疫血清在4X5孔塑料凹孔板中作滴定测定。以能与最高稀释度血清出现“十十”凝集者作为1个血凝单位。大量制备时需用1.5～2个血凝单位。

  3.红细胞的致敏与保存：取1份醛化并经洗涤的红细胞，加19~29份抗原提取物(ESS)，使红细胞与ESS的比例为1：20~1：30混合,置37~45℃水浴箱中致敏2~3小时，每隔1~5分钟摇匀1次，取出，置离心管中，离心沉淀，上清液保存，经滴定后可再用。致敏沉淀红细胞用生理盐水洗涤2次，再用pH7.4PBS洗涤1次，最后用pH7.4硼砂琥珀酸缓冲液配成2.5%致敏红细胞悬液，加0.2%用醛防腐，即为试验用的2.5%致敏细胞悬液。经敏感性和特异性测定合格后，冰箱保存备用。

【用途】

  用于钩端螺旋体间接红细胞血凝集试验。

  （上海市卫生防疫站 宦彭成编 叶自隽审）

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