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一、试验原理
用途：用于脆弱拟杆菌的分离培养。
原理：䏡胨、胰酪蛋白胨、大豆胨、酵母浸粉、牛肉浸粉、牛肝浸粉提供微生物生长所需的氮源、碳源、矿物质、维生素等；消化血清粉能够有效促脆弱拟杆菌的生长；葡萄糖提供碳源；磷酸二氢钾能够调节pH；氯化钠维持渗透压；可溶性淀粉能够吸收中和有毒的代谢产物；L-半胱氨酸和硫乙醇酸钠能够降低培养基氧化还原电位，有利于厌氧菌生长；琼脂是凝固剂。添加剂中的氯化血红素、维生素K1和脱纤维兔血能够有效促脆弱拟杆菌的生长；抗生素抑制其他细菌生长。
二、培养基配方（g/L）
|
䏡胨 |
15.0 |
|
胰酪蛋白胨 |
10.0 |
|
大豆胨 |
3.0 |
|
酵母浸粉 |
5.0 |
|
牛肉浸粉 |
2.0 |
|
消化血清粉 |
13.5 |
|
牛肝浸粉 |
1.2 |
|
葡萄糖 |
3.0 |
|
磷酸二氢钾 |
2.5 |
|
氯化钠 |
3.0 |
|
可溶性淀粉 |
0.3 |
|
L-半胱氨酸 |
0.15 |
|
硫乙醇酸钠 |
0.15 |
|
琼脂 |
13.0 |
|
pH值7.2±0.1（25℃） |
|
三、试验方法
1、称取本品71.8 g，加热溶解于1000 mL蒸馏水中，分装三角瓶，115℃高压灭菌15 min，冷却至50℃左右，每200 mL改良GAM琼脂需要添加1支无菌0.02%维生素K1，1支改良GAM琼脂抑菌剂，氯化血红素0.5 g，脱纤维兔血14 mL，混匀，倾入无菌平皿，备用。
2、制备质控菌株菌悬液，划线接种于待测培养基。
3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中，厌氧培养48 h。
四、质控结果
接种以下质控菌株，放置于36℃±1℃恒温培养箱中，厌氧培养48 h。试验结果如图所示。
|
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量（CFU） |
生长情况 |
其它特征 |
|
脆弱拟杆菌 |
ATCC 25285 |
/ |
+++ |
圆形凸起灰白色菌落，不溶血 |
|
金黄色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
/ |
- |
抑制 |
图1改良GAM琼脂培养基的质控菌株培养结果
五、注意事项
1、培养基中含有淀粉，若灭菌前未加热溶解，灭菌后可能出现少量白色沉淀。
2、每瓶需配套添加4盒HB8462a 0.02%维生素K1溶液和4盒HB8462b 改良GAM琼脂抑菌剂(含三种抗生素)和2100500氯化血红素和脱纤维兔血（可以用1001339-1脱纤维羊血替代兔血）。
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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
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