敏感动物——天然培养基之二

【原理】

  由于立克次体在活细胞中才能增殖，故选择实验动物首要条件是对所研究立克次体的易感性要高,特别是作为初代分离的动物更应该是最易感的。无胸腺裸鼠可能对立克次体更为易感。除恙虫病立克次体的易感动物为小白鼠，斑点热群中的小蛛立克次体可用豚鼠及小白鼠两种动物外，其它立克次体均以豚鼠最易感。某些立克次体株分离时用地鼠比豚鼠发病稳定，脾脏印片可见大量立克次体。

【成分】

  幼雄性豚鼠(300~400g)2只

  幼龄小白鼠(10~12g)4~6只

  家兔2只

  人虱及蜱若干

【制法】

  同一试验要选用大小一致的动物。豚鼠及小白鼠一般选用出生1个月左右者合适。试验前应注意仔细检查动物的健康情况,排除隐性感染,豚鼠应测量正常体温数日后方可选用。在可能条件下，尽量使用纯系动物。

【用途】

  用于接种分离立克次体。

  1.豚鼠:作为分离至少接种两只豚鼠,每只腹腔注射2~4ml标本悬液,也可由睾丸内接种0.25ml或皮下接种1ml。逐日观察动物，并于同一时间测量体温。除立氏立克次体和Q热立克次体某些株有时可致豚鼠死亡外，一般均不引起死亡，但通常均有发热反应（40℃或以上）。其潜伏期很不一定，随感染剂量和方法及病原体毒力强弱不同而有差异。一般初代分离时往往较长，而传代以后则逐渐缩短。感染莫氏立克次体及斑点热群病原体的豚鼠，常在发热同时或1~2日内出现阴囊红肿，睾丸不能推入腹腔（即Neill-Mooser现象），数日内逐渐消退。这种阴囊反应往往初代豚鼠并不出现或不明显，传代后趋于显著和规律。

  2.小白鼠：恙虫病及立克次体病原体分离时，将标本腹腔接种小白鼠4～6只,每只0.5～1.0ml。接种后5天内死亡者多不是因为立克次体感染。感染小白鼠死亡前均有明显症状，大多在病态出现后24小时内即濒死，恙虫病感染致死动物，解剖可见皮下水肿、淋巴结肿大充血、脾肿大，有腹水，腹膜刮片及腹水中均能检见细胞内大量立克次体，也可在细胞外发现。脾脏立克次体含量常仅次于腹水。用滴鼻法将莫氏立克次体感染小白鼠，均可引起小白鼠致死性肺炎，立克次体大量繁殖，在肺泡上皮细胞原浆内可整个地为立克次体所充满。Q热立克次体腹腔接种小白鼠后虽无任何发病征象，但立克次体能在体内大量繁殖，以感染后6天左右的脾脏印片，可见胞浆内外有聚集成团或分散的立克次体。

  3.家兔：家兔的睾丸及眼前房接种(先用1%盐酸可卡因点眼麻醉，将注射器针头由角膜缘向虹彩平行刺入，吸出前房水0.1~0.2ml后，再注入标本0.05~0.1ml)乃早期用作恙虫病立克次体分离者。

  4.人虱和蜱：人虱的各个发育期均对普氏立克次体十分易感，可用虱肛接种法和病人直接喂虱法培养立克次体，均可获得人工感染。斑点热群及Q热立克次体可在多种蜱内繁殖。一般感染是由吸吮感染动物血液或直接接种立克次体悬液于蜱血体腔内而发生。

【注意事项】

  1.动物品系：不仅不同种动物对立克次体易感性有别，即同一种动物的不同品系其易感性也有异。Kekcheeva等(1978)报告,对恙虫病立克次体最易感的小白鼠是近亲繁殖鼠和“瑞士”系小鼠，感染后死亡率高，在腹膜间皮内发现大量立克次体；而对CBA、C3HA及BALB/c小鼠则需很大量的立克次体（10³ELD₅₀)接种,才能死亡；也有的品系小鼠(如57黑毛鼠6号)对同一株恙虫病立克次体感染的自然抵抗力很大，虽有感染的证据（可以测出抗体)，但无症状。

  2.X线照射及免疫抑制剂:通常由小白鼠腹腔接种普氏立克次体只引起隐性感染，而且常不能连续传代。但是，如果小白鼠经X线照射后，则可增加其易感性，虽经腹腔接种小量普氏立克次体也能使其在几天内死亡，并在腹膜中发现大量立克次体。经环磷酰胺处理过的小鼠，增强了对恙虫病、小蛛、普氏及Q热立克次体在这样的小鼠体内增殖非常好，并可成功地分离恙虫病立克次体弱毒株。肾上腺皮质激素也能影响实验动物对立克次体的易感性。预先经可的松处理的幼鼠，腹腔接种西伯利亚立克次体后发生明显的腹膜炎，并有立克次体大量繁殖。

  3.营养及温度:实验动物缺乏蛋白质及某些维生素时，对立克次体感染的抵抗力减低。如饲料中的泛酸、核黄素及硫胺素的含量降至正常量的1/10时，大白鼠感染莫氏立克次体后3～4天即死，并能在所有器官中发现立克次体。饥饿能降低动物的防御能力，使感染严重恶化。

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