鸡胚—-天然培养基之一

  立克次体需要在活的细胞中才能增殖，鸡胚卵黄囊的细胞代谢低是立克次体最敏感细胞之一，故此细胞很适合立克次体的增殖。

【成分】

  受精鸡胚（蛋）若干只。

【制法】

  选用产后未超过10日并保存于5～20℃（最好10℃左右）的受精鸡卵孵育。产卵鸡应健康，未喂含抗生素的食物者。一般喜用莱享鸡卵,因其壳薄色浅，易于照视。将鸡卵置于38~39℃、相对湿度为45%~60%的孵卵箱中孵育，每日翻卵2～3次。如少量鸡卵孵育，可将卵气室端向上直立于卵盘中孵入普通孵箱(置水槽维持湿度),并不需每日翻动。孵育第4日后用检卵灯检视发育情况,挑出未受精及死亡者。未受精卵仅见模糊卵黄黑影,无鸡胚迹象;如鸡胚活动呆滞或不能主动运动，血管昏暗或断折沉落者为濒死或死亡鸡胚。在孵育后第3~4天中，因受各种因素的影响，鸡胚可有3%~4%死亡，第19~20天死亡率达4%~15%，其卵育期中死亡率约在10%。生活鸡胚检视时可见清晰血管小团或花纹，其中有鸡胚暗影，稍大者并见胚动。

【用途】

  用于增殖和分离立克次体

  1.接种：选孵育6~7日的鸡卵，经照视后划出胎位，仍使气室向上直立在卵盘上。先用碘酒消毒气室端，然后以烧灼的尖锥在气室端中央卵壳刺一小孔，再用碘酒或酒精棉球擦去壳屑。以2或5ml注射器装4~5cm长针头吸取接种材料，通过锥孔，沿卵的纵轴插入约3cm，注射0.2~0.5ml,每份标本至少接种5只鸡卵。用碘酒消毒针孔附近，以熔化稍冷的石蜡封孔，再置于32~35℃孵育。

  2.收获及传代：接种后第3天起每隔12～24小时照视1次，3天以前死亡者弃去，将4天后死亡的鸡胚置冰留待解剖。解剖时，以无菌法除去气室部卵壳及卵壳膜，打开绒毛尿囊膜，切断卵黄蒂，取出卵黄囊，挤去卵黄；或先将鸡胚夹出，再收集卵黄囊膜亦可。经涂片染色镜检，选择含立克次体较多(25个视野中平均每视野11~100个，或100~1000个，亦即++或+++)而又未发现细菌污染的卵黄囊膜，作成适当浓度的悬液接种鸡胚传代。一般最初几代接种量宜大，鸡胚常不死或死亡较晚；以后逐渐适应，则每于接种后4~6日死亡，最好减少剂量或浓度，如能控制在接种后10～12天大部死亡者，每能获得立克次体丰盛的发育。

【注意事项】

  1.控制污染:鸡胚卵黄囊对细菌的侵入较鸡胚其它任何部位都更易感，只要有极少杂菌进入，即可大量繁殖。对鸡胚毒力较低的细菌污染后，第1代菌数较少时，不一定使鸡胚死亡，有时可与立克次体同时并存，经连续传代后而终于不可收拾，如在接种材料中加青霉素100~1000u/ml(或再加链霉素100~500μg/ml),可有效控制细菌污染。

  2. 胚龄选择:孵育5~9天的鸡胚均可用,但一般以6~7天者为宜。不同孵育阶段卵黄囊膜细胞代谢类型和代谢速率的变化，似乎能影响对立克次体的易感性及立克次体的繁殖速率。孵育至第10~15天的胚胎代谢减缓,组织和器官的分化及成熟迅速进行，接种后的立克次体在此时也常能迅速增殖。

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