培养基适用性检查需要做哪些项目？

培养基适用性检查是微生物检验质量控制的重要环节，目的是确认实验室自配培养基、商品化成品平板/液体培养基能够满足检验要求，避免因培养基质量缺陷造成假阴性、假阳性结果。根据《中国药典》四部通则9203，在实验室中，每批商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应符合培养基适用性检查的要求。试验用菌种可根据培养基的用途从相关通则中进行选择，也可增加生产环境及产品中常见的污染菌株。

依据《中国药典》四部通则1105、1106、1101，培养基适用性检查分为计数用培养基与控制菌检查用培养基、无菌检查用培养基两大体系，核心项目包含促生长能力、抑制能力、指示特性，无菌检查培养基还需增加无菌性检查与灵敏度检查。

一、培养基适用性检查包含的主要项目

按检验用途，培养基适用性检查项目分为计数用培养基适用性验证、控制菌检查用培养基适用性验证、无菌检查用培养基适用性验证。

1、微生物计数培养基（通则1105）

主要包括TSA、TSB、SDA等培养基，用于总需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数，重点验证在规定的试验条件下，培养基能否支持目标试验菌正常生长，有无明显生长抑制。

操作方法：按图1相关内容，接种不大于100 CFU的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基，按图1中规定的条件下培养。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

结果判定：被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基与对照培养基比较，试验菌应生长良好。

图1 计数培养基适用性检查的试验菌液制备和使用

2、控制菌检查培养基（通则1106）

主要包括麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基、RV沙门菌增菌液体培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂等培养基，用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示特性的检查，各培养基的检查项目及所用菌株见图2。

图2控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特性

2.1、促生长能力检查

促生长能力检查分为液体培养基促生长能力检查和固体培养基促生长能力检查。

液体培养基促生长能力检查操作方法为分别接种不大于100 CFU的试验菌（见图2）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。

固体培养基促生长能力检查操作方法为：用涂布法分别接种不大于100 CFU的试验菌（见图2）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。

2.2、抑制能力（非目标杂菌应被有效抑制）

接种不少于100 CFU的试验菌（见图2）于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不小于规定的最长培养时间下培养，试验菌应不得生长。例如，麦康凯琼脂培养基应能抑制金黄色葡萄球菌。

图3 麦康凯琼脂培养基的质控菌培养结果。

2.3、指示特性

目标菌的显色、变色、沉淀等生化反应特征符合预期，用于区分目标菌与杂菌。例如，木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基应能区分沙门氏菌和大肠埃希氏菌。

图4 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基对沙门氏菌的选择性分离结果

用涂布法分别接种不大于100 CFU的试验菌（见图2）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及培养时间范围内培养，被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。

3、无菌检查培养基（通则1101）

主要包括硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基等培养基，用于在规定的试验条件下，确认培养基本身无微生物污染；

3.1、无菌性检查

每批随机取部分培养基，置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。

3.2、灵敏度检查

取适宜装量的硫乙醇酸盐流体培养基7管，分别接种不大于100 CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2管，另1管不接种作为空白对照；取适宜装量的胰酪大豆胨液体培养基7管，分别接种不大于100 CFU的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管，另1管不接种作为空白对照。接种细菌的培养基管培养时间不得超过3天，接种真菌的培养基管培养时间不得超过5天。

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。

二、培养基适用性检查的注意事项

1、适用对象

所有成品预制培养基、脱水干粉培养基、实验室自行配制培养基，每批次均应开展适用性检查；干粉更换批号、灭菌工艺、配方变更后，必须重新验证。

2、菌株基本要求

试验菌株优先使用CMCC、ATCC等标准菌株；传代次数不得超过5代（冻干原始菌种计为第0代），防止菌种性状退化影响试验结果。

3、通则1105（微生物计数）判定原则

控制最终接种量≤100 CFU，同步设置合格对照培养基、阴性空白对照和不少于2个平皿/试管的平行试验；固体培养基菌落平均数比值在0.5～2.0之间，且菌落形态与对照一致；液体培养基要求试验菌生长良好。

4、通则1106（控制菌检查）判定原则

促生长：低接种量（≤100 CFU）目标菌可正常生长。

抑制能力：高接种量（≥100 CFU，通常≥1000 CFU）非目菌应不生长。

指示特性：目标菌产生典型颜色、沉淀、溶血等特征反应，与对照培养基无差异。

5、通则1101（无菌检查）

无菌性检查：每批随机抽取不少于5支/瓶，按规定温度培养14天，应无菌落生长。

灵敏度检查：采用低接种量试验菌，确认培养基能够检出微量目标微生物。

6、实施时间

适用性检查可在样品检验前完成，也可与供试品检验同步开展；培养基储存周期较长、运输条件剧烈变化时，可考虑增加稳定性抽检。

7、培养基适用性检查与供试品的方法适用性试验的区别

培养基适用性检查≠供试品的方法适用性试验。前者考核培养基本身质量；后者考核样品、稀释液、中和体系是否存在抑菌干扰，二者不可混淆。

三、总结

培养基适用性检查是微生物检验结果可靠的前提，药典1101、1105、1106对不同用途培养基设置了差异化验证项目与判定标准。实操核心为：采用标准菌株、严格控制接种量、同步对照、规范培养与结果比对；区分培养基本身适用性和样品方法适用性，避免概念混淆。每批次培养基完成适用性检查并留存完整记录，满足GMP、药典合规要求。

四、产品展示

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表1 产品信息

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