Amies运送培养基活性炭分布不均匀怎么办？

一、简介

Amies运送培养基，在临床微生物广泛用于拭子标本采集、转运保存，只维持细菌存活，不允许细菌大量增殖，避免标本结果失真。主要成分有磷酸盐缓冲体系、氯化钠、钾钙镁盐、硫乙醇酸钠、琼脂；分为含活性炭、不含活性炭两个版本。

含炭版本在生产过程中有一个难点，活性炭是不溶颗粒，灌装冷却阶段易沉降、分布不均（如图1），需要控制搅拌、灌装温度、灌装后颠倒混匀工艺。

（左：活性炭分布均匀  右：活性炭沉降分层）

Amies是半‑固体琼脂体系，活性炭是悬浮颗粒，不溶解，靠琼脂凝胶网络把炭颗粒托住；一旦沉降速度＞凝胶固化速度，就会分层、分布不均。生产过程中，常出现管底部炭大量沉积、局部炭团块、上部炭少，整管黑白分层，部分小管出现半边黑半边浅灰。本文从原料、配制、灭菌后冷却灌装、硬件工艺四个方面阐述产生的原因和解决方法。

二、产生原因

1、活性炭原料本身问题

（1）活性炭颗粒粒径偏大，沉降速度快；颗粒团聚结块，入水打散不开，形成炭团沉底。

（2）活性炭润湿差，入水漂浮抱团，搅拌后仍有小团聚体。

（3）活性炭批次杂质多，金属离子高，促使颗粒絮凝抱团。

2、配制溶解阶段问题

（1）加料顺序错误：干粉直接一股脑倒入水中，活性炭遇水抱团，内部干芯无法打散。

（2）搅拌方式不足：仅普通磁力搅拌，无剪切，团聚炭颗粒没有被打碎；搅拌速度过高带入大量气泡，气泡裹挟炭上浮，局部聚集。

（3）煮沸溶解不充分，琼脂没有完全水化，凝胶网络弱，后期托不住炭颗粒。

（4）pH偏离7.2±0.2，颗粒表面电荷改变，活性炭发生絮凝团聚沉降。

3、灭菌后、灌装、冷却阶段（量产最主要根源）

（1）灭菌结束后，培养基静置降温，没有持续低速搅拌，活性炭重力沉降，罐底炭富集，灌装前期出来炭浓度高，后期炭少，整批管子炭含量不一致。

（2）灌装温度过低：琼脂开始局部预凝胶，炭被锁住形成局部斑块；温度过高，琼脂粘度太低，炭沉降速度快。

（3）灌装完成后，冷却固化速度太慢：凝胶形成时间长，炭颗粒有充足时间向下沉降。操作中，建议50℃‑55℃灌装，在琼脂凝固之前，持续悬浮；凝固过程中适度颠倒混匀，不能静置直立冷却。

（4）灌装后管子直立静置冷却，完全没有颠倒/翻转动作，炭直接全部沉管底。

4、工艺硬件问题

（1）配液罐搅拌桨选型不合适，罐底部存在搅拌死区，罐底沉积炭泥。

（2）管路、灌装机管路死角，炭颗粒沉积在管路，灌装时断续冲出，造成单管炭忽多忽少。

三、对应的解决措施

1、原料端控制

（1）活性炭选用药用粉末活性炭，粒径控制，避免大颗粒；来料过筛，去除团聚大颗粒。

（2）做小试确认每批活性炭分散性能，出现入水抱团的批次拒收。

2、配液溶解工艺优化

（1）调整加料顺序，纯化水先加入配液罐，开启搅拌；干粉少量分次撒入液面下，不要直接倒水面上，防止浮起结团；也可先把干粉调成糊状，再冲入大量水。

（2）充分煮沸，保证琼脂完全水化；搅拌采用低速+适当剪切，不能高速打大量气泡；必要时小试阶段短时超声破除炭团聚（量产可用高剪切分散）。

（3）严格校正pH计，终pH控制7.2±0.2，pH异常会加重炭絮凝沉降。

3、灭菌后配液罐管控（量产最重要）

（1）灭菌结束，泄压完成，罐内开启低速持续搅拌，不能停搅拌，防止炭沉降罐底。

（2）降温控制，维持50℃‑55℃进行灌装；温度＞60℃，粘度太低炭沉降快；＜48℃，琼脂局部预凝，出现斑块。

（3）定期对配液罐底部取样，检测炭浓度，确认罐内没有沉降分层。

4、灌装后冷却固化工艺（关键控制点）

（1）灌装完成，盖拧紧；在琼脂尚未凝固阶段（约48℃‑52℃区间），整筐管子进行数次轻柔颠倒翻转，使炭颗粒重新悬浮，禁止剧烈震荡（防止大量气泡）。

（2）颠倒之后，快速冷却，缩短凝胶成型时间，减少炭颗粒沉降时间；不要缓慢自然降温。

（3）禁止灌装之后直接直立静置慢慢冷却，这是绝大多数厂家炭沉底的直接原因。

5、设备管路优化

（1）搅拌桨位置伸入罐下部，消除罐底搅拌死区；定期清洗配液罐底部沉积炭泥。

（2）灌装管路尽量短，减少死角；生产间隙冲洗管路，清除沉积活性炭。

四、异常处置（已经出现炭分布不良的半成品）

（1）如果培养基还没有凝固：水浴复温到50‑55℃，低速搅拌充分悬浮炭，重新灌装，固化阶段颠倒混匀。

（2）已经完全凝固、炭大量沉底：不可返工使用，凝胶结构成型后炭颗粒无法重新均匀分散，只能报废。

五、简易小试验证方法

小试1L模拟生产，观察确认①配制后炭是否完全悬浮无肉眼团块；②灭菌降温52℃，静置30min，看底部是否明显炭沉淀；③灌装后，做“颠倒 vs 不颠倒”两组对比，直观确认分布差异。

六、注意事项

Amies中含硫乙醇酸钠要注意，反复高温、长时间敞口搅拌会被氧化，配液、灭菌后尽量减少高温敞口暴露，兼顾炭分散同时，保护还原体系不失效。

为方便使用，避免制作繁琐，可优先选用即用型产品（如图2）。

图2  公司现有Amies产品编号及规格

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

上一篇：BCSA培养基简介

下一篇：没有了！