各类菌株活化的培养基和温度选择

微生物活化培养是微生物检测、菌种保藏、药理实验、食品质控、临床病原筛查等所有微生物相关工作的前置基础步骤。菌株能否顺利复苏、正常增殖，直接取决于两大核心条件：适配的专用培养基、精准可控的培养温度与环境。不同门类微生物，从普通革兰氏阴阳细菌、真菌、放线菌，到厌氧菌、微需氧菌、苛养菌、支原体、军团菌，生理代谢需求差异巨大，通用培养基无法满足全部菌株生长需求；温度、氧气、二氧化碳、厌氧等培养环境参数稍有偏差，就会出现菌落不生长、复苏迟缓、菌株活力下降、实验数据失真等问题。

市面上培养基品类繁多，TSA、营养琼脂、PDA、血平板、巧克力平板、BCYE、MRS、硫乙醇酸盐流体培养基等各司其职，很多实验室新人在菌种活化时，常出现培养基选错、温度设置错误、培养时长不足等操作失误。本文按微生物大类系统梳理各类常见菌株对应的培养基、培养温度、培养时长与特殊环境要求，覆盖通用细菌、真菌、放线菌、厌氧菌、乳酸菌、弧菌、苛养致病菌、支原体、军团菌等主流菌种，兼具理论依据与实操指导，为实验室菌种活化、微生物检测工作提供标准化参考。

一、最常见细菌的培养

大肠埃希氏菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、李斯特氏菌等为临床、食品检测最常用的普通细菌，是实验室使用频率最高的菌株。这类菌株代谢能力强，营养需求简单，无需特殊生长因子，TSA（胰酪大豆琼脂）、TSB肉汤、NA 营养琼脂、NB 营养肉汤是通用基础培养基。

标准活化条件统一为30℃-36℃有氧培养18 h-24 h。TSA 与营养琼脂作为固体培养基，用于菌株划线纯化、菌落形态观察；TSB、营养肉汤作为液体培养基，用于菌种增菌、复苏传代。该类培养基配方均衡，蛋白胨提供氮源，氯化钠调节渗透压，适配绝大多数异养型细菌，是微生物实验室常备基础培养基。

该大类包含几十种常见致病菌与标准质控菌株，适用场景覆盖食品菌落总数检测、环境微生物筛查、药品微生物限度检查。在36℃恒温条件下，菌株分裂速度最快，18 h-24 h即可形成清晰单菌落，若温度低于30℃，生长周期会延长至48 h以上，不利于快速实验。

二、真菌类菌株的培养

真菌包含酵母菌与霉菌两大分支，生理特性与细菌完全不同，偏好微酸性环境，最适生长温度更低，培养周期显著更长，以黑曲霉为例，霉菌生长速度远慢于细菌，低温环境能避免菌丝疯长、孢子发育不完全，若置于36℃细菌培养箱，黑曲霉会出现生长停滞、无法产孢的问题。不能使用细菌通用 TSA、营养琼脂培养基。

配套培养基为沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、沙氏葡萄糖液体培养基（SDB）、马铃薯葡萄糖培养基（PDA），培养温度20℃-25℃，培养周期3-5天，黑曲霉可延长培养至7天。白色念珠菌和黑曲霉在SDA上的生长如图1所示。

图1 白色念珠菌和黑曲霉在SDA上的生长示例

白色念珠菌和黑曲霉在SDB上的生长如图2所示。

图2 白色念珠菌和黑曲霉在SDB上的生长示例

如图2所示，白色念珠菌和黑曲霉在SDB上分别变浑浊和产生絮状菌丝。SDA自带弱酸环境，可抑制杂菌细菌滋生，适合酵母菌分离纯化；而PDA 以马铃薯浸汁和葡萄糖为营养源，天然有机质充足，更适合酵母菌大规模扩培。两类真菌培养基均不含高含量蛋白胨，依靠植物源糖类、有机酸供给营养，和细菌培养基配方形成明显区分，也是食品霉菌酵母菌计数检测的法定培养基。白色念珠菌和黑曲霉在PDA上的生长如图3所示。

图3白色念珠菌和黑曲霉在PDA上的生长示例

三、放线菌培养

白色链霉菌是典型放线菌，虽具备丝状菌丝结构，但属于原核细菌，不能使用真菌PDA培养基活化，需选用ISP2培养基，培养温度28℃-30℃，培养3-5天。

ISP2为专用合成放线菌培养基，精准匹配放线菌代谢需求，低氮高碳配方适合菌丝与孢子生成；温度区间避开细菌36℃、真菌25℃，28℃温和环境可促进营养菌丝和气生菌丝分化。土壤微生物分离、抗生素研发实验室大量使用ISP2培养基活化各类链霉菌，温度过高会抑制放线菌孢子形成，温度过低则生长周期翻倍。

四、常见厌氧菌的培养

1.厌氧梭菌

产气荚膜梭菌、生孢梭菌、艰难梭菌为严格厌氧菌，有氧环境下菌体快速失活，必须使用厌氧配套培养基与厌氧培养箱。推荐培养基分为液体和固体两类，液体培养基，如硫乙醇酸盐流体培养基、庖肉培养基，培养温度30℃-36℃，厌氧培养24 h-48 h。

硫乙醇酸盐流体培养基培养菌株示例如图4所示。

图4 硫乙醇酸盐流体培养基培养菌株示例

庖肉培养基培养菌株示例如图5所示。

图5 庖肉培养基培养菌株示例

如图5所示，产气荚膜梭菌和生孢梭菌在疱肉培养基上生长后出现浑浊现象。

两种液体培养基各有优势，硫乙醇酸盐流体培养基可快速完成短期增菌，但菌株存活时间短；庖肉培养基富含肉类浸出物，还原性环境稳定，适合梭菌长期保藏、传代活化。

除液体培养基外，固体培养基可选血平板、哥伦比亚平板，培养温度30℃-36℃，厌氧培养24 h-48 h。产气荚膜梭菌在血平板上的生长状态如图6所示。

图6 产气荚膜梭菌在血平板上的生长状态

如图6所示，产气荚膜梭菌在血平板上的溶血现象为有双层溶血环，内环完全溶血，是由于θ毒素的作用；外环不完全溶血则是由α毒素所致。

这里应注意的是，血平板本身不具备厌氧环境，需将血平板放入至专用厌氧盒中，厌氧盒中放入厌氧产气包。厌氧产气包如图7示例。

图7 厌氧产气包样式示例

2.双歧杆菌等

植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、婴儿双歧杆菌等益生菌，统一使用MRS琼脂 、 MRS 肉汤，标准温度36℃±1℃，培养 24 h-48 h；其中双歧杆菌为专性厌氧菌，全程厌氧环境培养，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌为兼性厌氧菌。MRS培养菌株示例如图8所示。

图8 MRS 培养菌株示例

MRS培养基添加醋酸盐、吐温80等选择性成分，可抑制杂菌，专一促进乳酸菌增殖，广泛应用于发酵食品、益生菌制剂研发。温度严格控制在 36℃左右，温度波动超过2℃会直接影响乳酸菌产酸能力；双歧杆菌对氧气极度敏感，培养箱需维持无氧氛围，否则活化失败。

五、嗜盐弧菌的培养

副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等水产来源致病菌，耐高盐，普通TSA渗透压不足，无法支撑生长，需选用2216E液体、琼脂、3%氯化钠TSA，30℃-36℃培养18 h-24 h。示例副溶血性弧菌、哈氏弧菌分别在2216 E液体、琼脂培养基上的生长状态如图9所示。

图9 副溶血性弧菌、哈氏弧菌分别在2216E液体、琼脂培养基上的生长状态（上图为液体培养基、下图为琼脂培养基）

如图9所示，副溶血性弧菌和哈氏弧菌在2216E液体培养基上生长后产生浑浊现象。在2216E琼脂培养基上生长后为白色菌落。  

培养基内添加氯化钠模拟海水环境，平衡菌体渗透压，是水产品微生物检测常用培养基。温度区间贴合海洋微生物生存环境，18 h即可完成初代复苏，常用于海鲜、生鲜食材致病菌筛查。

3.拟杆菌

脆弱拟杆菌为临床常见肠道厌氧菌，培养基可选血平板、GAM培养基、BBE 琼脂，36℃±1℃严格厌氧培养24 h-48 h。脆弱拟杆菌分别在GAM、BBE培养基上的生长示例如图10所示。

图10 脆弱拟杆菌分别在GAM、BBE培养基上的生长示例（左图为GAM、右图为BBE）

BBE 具备鉴别功能，可区分拟杆菌属其他菌种，GAM为通用厌氧增菌肉汤，常用于临床粪便样本厌氧菌分离。

六、血液依赖型苛养细菌的培养

这类菌株自身无法合成血红素、NAD 等生长因子，必须依靠裂解血液供给营养。

1.肺炎链球菌、溶血性链球菌，

使用血平板，36℃±1℃有氧培养24 h-48 h，依靠完整红细胞提供生长营养，可观察溶血环完成菌种鉴别。示例肺炎链球菌在血平皿上产生的α溶血环如图11所示。

图11 肺炎链球菌在血平皿上产生α溶血环

2.脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌

选用血平板或巧克力平板，36℃±1℃培养36 h-72 h；奈瑟菌初代分离必须置于5%-10%二氧化碳培养箱，高二氧化碳环境刺激菌株复苏。巧克力平板经过高温裂解红细胞，释放游离血红素，完美适配流感嗜血杆菌这类极度苛养菌株。

3.微需氧弯曲菌

空肠弯曲菌、结肠弯曲菌对氧气、温度均有严苛要求，培养基选用血平板，培养温度提升至42℃，微需氧环境（5%氧气、10%二氧化碳、85%氮气）培养 24 h-48 h。不同氧气条件、不同温度条件的空肠弯曲菌在哥伦比亚血平皿上的生长比较如图12所示。

图12 不同氧气条件下的空肠弯曲菌在哥伦比亚血平皿上的生长比较

常规36℃细菌培养温度无法满足弯曲菌代谢需求，42℃是其专属最适温度；有氧、无氧环境均会抑制生长，必须配套微需氧产气袋，是畜禽肉类、生鲜食材致病菌检测重点菌株。

这里同样应注意的是，血平板本身不具备厌氧环境，需将血平板放入至专用厌氧盒中，厌氧盒中放入微需氧产气包。微需氧产气包如图13所示。

图13 微需氧产气包示例

七、支原体的培养

支原体无细胞壁，普通细菌培养基无法支撑生长，口腔支原体使用精氨酸支原体肉汤，肺炎支原体采用支原体肉汤，鸡毒支原体采用改良Frey氏培养基，36℃±1℃、5%-10% 二氧化碳环境培养3-7天。初代复苏难度极高，单次培养若无肉眼可见浑浊，需盲传 2 次，部分菌株甚至需要数周才能完成活化，是所有菌株中培养周期最长的类别。

口腔支原体、肺炎支原体、鸡毒支原体分别在精氨酸支原体肉汤、支原体肉汤、改良Frey氏培养基上的生长状态如图14所示。

口腔支原体已培养7天-灵敏度到7

肺炎支原体已培养12天-灵敏度到9

鸡毒支原体已培养5天-灵敏度到9

图14 口腔支原体、肺炎支原体、鸡毒支原体分别在专用培养基上的培养

如图14所示，口腔支原体利用精氨酸生长，阳性变化为变粉红；肺炎支原体和鸡毒支原体利用葡萄糖等，阳性变化为变黄。

八、军团菌的培养

常见军团菌如博兹曼军团菌、嗜肺军团菌，专属BCYE 培养基，36℃±1℃培养 3-7 天，初代培养放置5%二氧化碳环境生长效果更佳。军团菌来源于水环境，是空调、饮用水系统风险致病菌，BCYE 添加半胱氨酸、铁离子等特有营养，市面上无其他通用培养基可替代。博兹曼军团菌ATCC 33217在BCYE 培养基上的生长状态如图15所示。

图15 博兹曼军团菌ATCC 33217在BCYE 培养基上的生长状态

九、总结

在食品检测、制药无菌检查、临床病原诊断、科研菌种保藏等工作中，只有精准匹配菌株对应的培养基、培养温度与气体环境，才能保证菌株正常复苏、菌落形态标准、实验数据稳定可靠。作为微生物行业从业者，熟练掌握各类常见菌株的培养规范，理清培养基选用逻辑与温度参数标准，能够大幅降低菌种活化失败概率，提升微生物实验整体效率。

十、培养基信息汇总

为方便广大客户查阅培养基使用，现汇总以上示例培养基信息如表1所示。不局限于示例的培养基，更多的培养基信息可参阅海博生物官方网站。

表1 示例培养基信息汇总

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

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