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培养基灭菌是微生物培养的关键环节,目的是彻底杀灭杂菌及其芽孢,同时最大程度保留营养成分。灭菌方式的选择,主要依据培养基成分的热稳定性、物理状态及使用要求,常用方法包括高压蒸汽灭菌、过滤除菌和间歇灭菌。
高压蒸汽灭菌是实验室和工业生产中最常用的灭菌方式,适用于含蛋白胨、牛肉膏、无机盐、淀粉等耐热成分的培养基。其原理是利用高温高压水蒸气使微生物蛋白质变性,可有效杀灭芽孢,常规条件为 121℃、15 至 20 分钟。对于含糖量较高的培养基,为避免葡萄糖高温焦化,需采用 115℃低压灭菌。该方法穿透力强、效果可靠,是多数基础培养基的首选。
过滤除菌适用于含热敏性物质的液体培养基,如添加抗生素、维生素、血清、酶制剂的培养基。通过 0.22μm 微孔滤膜物理截留微生物,全程无需加热,能完整保留营养活性。操作时需先将基础培养基高压灭菌,冷却后再无菌加入过滤后的热敏成分,该方法仅适用于液体,无法去除病毒和支原体。
间歇灭菌适用于不耐高温且无法过滤的培养基,通过 100℃蒸煮、保温培养的重复操作,杀灭芽孢萌发后的营养体,虽效果可靠但耗时较长,现已较少使用。干热灭菌仅适用于玻璃器皿,不用于培养基。
综上所述,培养基灭菌方式需以保护营养、彻底灭菌为原则,合理选择方法,才能保证微生物培养的顺利进行。
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