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【原理】
甘油为结核杆菌生长提供碳源,孔雀绿为抑制杂菌生长,蛋白陈、鸡蛋、脱脂牛奶是结核杆菌生长所需的氨源。
【成分】
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去皮或切成薄片的马铃薯 |
150g |
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马铃薯粉 |
12g |
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蛋白胨 |
20g |
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去脂牛乳 |
300ml |
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新鲜鸡蛋 |
8只 |
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蛋黄 |
2只 |
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甘油 |
24ml |
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20%孔雀绿溶液 |
10ml |
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蒸馏水 |
30ml |
【制法】
(1)先取马铃薯数只,去皮切成薄片称取150g,放入搪瓷杯内,将马铃薯蒸烂研碎。
(2)加入马铃薯粉,蛋白胨(先以少量蒸馏水溶解)及去脂牛乳、调匀。
(3)置于沸水内10分钟,再放入80℃水浴箱50分钟,取出后,冷却至50℃。
(4)取新鲜鸡蛋8只,用75%乙醇洗涤后,用灭菌纱布擦干。
(5)以无菌手续打开蛋壳,将8只鸡蛋全部打开,其内容物置于含有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内,加入无菌甘油,充分摇匀。
(6)然后将上述制成的马铃薯浆混入鸡蛋液内,摇5分钟,加入20%孔雀绿10ml,充分摇匀。
(7)用无菌纱布二层滤过,分装入15mmX155mm试管,每管5ml,斜置于85~90℃凝固器内约2小时,使其完全凝固为止,待冷却后放置冰箱。
(8)次日,以间歇灭菌法连续3天,每天1次,每次20分钟。灭菌完毕后,待冷,塞上无菌软木塞(须在烧热熔化的石蜡内浸过)。
【用途】
培养结核杆菌。
【注意事项】
在阿诺氏灭菌器内行间歇灭菌时,灭菌器盖子应略微开启,所用蒸汽不宜强烈,避免表面气泡形成,此法灭菌的温度大约在90℃。
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