组培相关问题十二

32.请问：（１）接种前，接种工具要浸泡在酒精中，所使用的酒精浓度该是多少，是75%还是95%？（２）我用新铁炮百合鳞片作外植体，对鳞片切割有没讲究什么方法，可以减少污染，书上讲根据极性方向接种到培养基上，怎么判断极性呢？（３）使用玻璃瓶＋不诱钢的盖子作为培养容器，透气性是不是不好，会影响培养效果吗？
答:接种工具接种灼烧前浸泡酒精的浓度，可以是75%也可以是95%的。至于极性指的就是植物材料有趋向发育的特征。比如是茎繁，靠近茎顶端发出芽子，远离顶端会长出根。是根繁的话，新芽发生于近心端，新根发生于远心端。因此在接种时，尽量不要使材料倒置，尽量保持植物的极性方位，不能将茎端插入培养基内。培养容器的透气性是决定瓶内湿度和气体状况的主要因素，因此如果过于密封，使瓶内外得不到气体交换，就会不同程度的受到影响。

33.有什么方法可以是悬浮培养的植物细胞分散开,形成单细胞？
答:首先选择一块外观疏松、容易碎裂、生长快的浅色愈伤组织，用接种器具简单粉碎后，放到液体培养基中震荡培养，经过1－2周的培养后，悬浮液中既有游离的单细胞，又有较易破碎的细胞团，也有大的愈伤组织块。为了提高培养物中单细胞的比例，在继代培养时，需要用细口的移液管或注射器，只吸出游离的单细胞或小的细胞团来接种。必要时可加入少量果胶酶，培养基中和瓶壁上会有大量的单细胞和小细胞团，把他们收集后，转移到新鲜培养基中，放到摇床上再次继代培养。
也可将第一代细胞悬浮液停止震荡使大的细胞块和组织沉淀于容器底部，取上部悬浮液进行接种，或在无菌条件下用纱布、不锈钢网过滤，用滤液接种。对于分散性不好的材料，经过多次转接后，分散程度会大大提高。