细菌内毒素检查法检测注射用盐酸大观霉素中细菌内毒素的研究

注射用盐酸大观霉素（Spectinmycin Hydrochliride for injection，SHI）又称淋必治，临床上主要用于淋球菌等感染，其内毒素检测现行标准采用家兔热原法（卫生部药品标准1994年），操作费时，成本高。美国药典^［1］采用细菌内毒素检查法（简称内毒素法），国内尚未见报道采用此法。为此笔者考察了采用内毒素检查法的可行性并与家兔法进行了比较，结果满意，现报道如下。

1　实验材料

　　鲎试剂TAL（湛江安度斯生物有限公司，经灵敏度复核合格）；细菌内毒素工作标准品（中国药品生物制品检定所，批号9603，规格60EU／支）；注射用盐酸大观霉素（普强苏州制药有限公司）；细菌内毒素检查用水（简称水，湛江安度斯生物有限公司，内毒素含量＜0.0015 EU／ml）。

2　方法与结果

2.1　SHI细菌内毒素限值（L）的确定
　　SHI的热原剂量（M）：M＝75 mg／ml、1ml／kg，致热反应阈值（K）为5 EU／kg，则L＝K／M＝0.067 EU／mg或5.0 EU／ml（以75 mg／ml的溶液计）。
2.2　最大非抑制浓度测定
　　将SHI用水配制成75 mg／ml的溶液，再作10、20、40、80、160倍稀释，得到样品的浓度系列记为Sw；另制备一同样浓度系列的样品溶液，但在制备时加入内毒素，使每一浓度的样品溶液中都含有0.25 EU／ml浓度的内毒素记此系列为SE。选用灵敏度λb为0.125 EU／ml的TAL，分别与SW和SE两个系列反应，结果（见表1）。表明SHI在上述稀释倍数时对内毒素检查均无抑制作用。

表1　最大非抑制浓度测定 TAL（批号960811Bλ＝0.125 EU／ml）

2.3　SHI的干扰试验
　　取3批经热原检查合格的SHI，分别用水制成75 mg／ml的溶液后，再作40倍稀释，用这些样品液分别依法试验^［2］，结果（见表2）。鲎试剂在水和SHI溶液中的灵敏度均在0.5λb～2λb范围内，表明样品无干扰作用。

表2　干扰试验（λ＝0.125 EU／ml）

2.4　家兔法与内毒素法的比较：家兔法的剂量见2.1项下，内毒素法取家兔法项下的溶液用水按1∶40稀释，用λ＝0.125 EU／ml的TAL进行试验，共检测27批，结果两法全部合格，符合率100％。

3　讨　论

3.1　美国药典规定SHI的L值为0.09 EU／mg（是以SHI的净含量计），本文求出的L值为0.067 EU／mg（是以SHI的重量计），经实际含量换算本文的L值为0.1 EU／mg，二者基本一致。
3.2　试验表明，用内毒素法取代家兔热原法检测SHI细菌内毒素是可行的，且经济、简便、快速。

作者单位：江苏省苏州市药品检验所

参考文献
1　USP XXIII，1995∶1434
2　中华人民共和国药典，二部附录，1995；76

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