小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(3)

 

　　（一）改良磷酸缓冲液

成分：磷酸氢二钠（Na2HpO4）	8.23g
磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）	1.20g
氯化钠	5g
蒸馏水	1000mL
山梨醇	20g
三号胆盐	15g

 

制法：将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中，再加山梨醇及胆盐，溶解后校正pH为7.6，分装试管，于121℃高压灭菌15min备用。

 

（二）CIN-I培养基

成分：胰胨	20g
酵母浸膏	2g
甘露醇	20g
氯化钠	1g
丙酮酸钠	2g
去氧胆酸钠	2g
硫酸镁（MgSO4·7H2O）	0.01g
琼脂	12g
蒸馏水	950mL
pH7.4±0.1

 

制法：上述成分溶于蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，待冷至80℃时加入二苯醚（用95％的乙醇配成0.4％的溶液）1mL，混匀，冷至50℃左右时加入中性红（3mg/mL）10mL，结晶紫（0.1mg/mL）10mL，头孢霉素（1.5mg/mL）10mL，新生霉素（0.25mg/mL）10mL，最后不断搅拌，加入10％的氯化锶10mL，倒平皿。

 

（三）改良y培养基

成分：蛋白胨	15g
氯化钠	10g
乳糖	2g
草酸钠	2g
去氧胆酸钠	6g
三号胆盐	5g
丙酮酸钠	2g
孟加拉红	40mg
水解酪蛋白	5g
琼脂	17g
蒸馏水	1000ml
ph7.4±0.1

 

制法：将上述成分溶解于蒸馏水，121℃ 15min高压灭菌。

 

 

（四）改良克氏双糖铁琼脂

成分：蛋白胨	20g
牛肉膏	3g
酵母浸膏	3g
甘露醇	20g
葡萄糖	1g
氯化钠	5g
柠檬酸铁铵	0.5g
硫代硫酸钠	0.5g
琼脂	12g
酚红	0.025g
蒸馏水	1000mL
pH7.4

 

制法：除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸以溶化琼脂，加入0.2％酚红水溶液12.5mL摇匀，分装试管，121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。

 

 

（五）糖发酵培养基

成分：牛肉膏	5g
蛋白胨	10g
氯化钠	3g
磷酸氢二钠	2g
0.2％溴麝草酚蓝溶液	12mL
蒸馏水	1000mL

 

制法：将上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压15min灭菌，另将蔗糖、棉子粮、山梨醇、甘露醇、鼠李糖等分别配成10％溶液，同时高压灭菌，将5mL糖液加入100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。

 

 

（六）氨基酸脱羧酶试验培养基

成分：蛋白胨	5g
酵母浸膏	3g
葡萄糖	1g
蒸馏水	1000mL
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液	1mL
L-氨基酸或DL氨基酸	0.5或1g/100mL
pH6.8

 

制法：除氨基酸以外，将其他成分加热溶解，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸，校正pH，对照培养基不加氨基酸，分装试管，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。

试验方法：接种培养物后于37℃培养24h观察结果，阳性者产碱，培养其呈紫色，阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色，对照管应为黄色。

 

 

（七）缓冲葡萄糖蛋白胨水（V-P试验用）

成分：磷酸氢二钾	5g
多胨	7g
葡萄糖	5g
蒸馏水	1000mL
pH7.0

 

制法：将上述成分溶化后校正pH，分装小试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。

试验方法：接种培养物于37℃培养2~4d，加入6％α-萘酚酒精溶液0.5mL和40％氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果，立刻或数分钟内出现红色者为阳性反应。

 

 

（八）碱处理液

氢氧化钾0.5g，氯化钠0.5g，加入蒸馏水100mL配成0.5％氢氧化钾-氯化钠溶液。

 

 

（九）动力试验培养基

成分：蛋白胨	1g
牛肉膏	0.3g
氯化钠	0.5g
琼脂	0.35~0.4g
蒸馏水	100mL

 

制法：按以上成分配好，煮沸使溶解，校正pH为7.4，分装小管，121℃高压灭菌15min，起立凝固备用。

 

 

（十）尿素培养基

成分：尿素	20g
酵母浸膏	0.1g
磷酸二氢钾（KH2PO4）	9.1g
磷酸氢二钠（Na2HPO4）	9.5g
酚红	0.01g
蒸馏水	1000mL

 

制法：将上述成分于蒸馏水中溶解，校正pH为6.8±0.2，不要加热，过滤除菌，无菌分装于灭菌小试管中，每管2~3mL。