菌落PCR的方法

1 最简单的：用枪尖或者牙签从平板或液体中沾少量菌（多了就会影响反应了，沾上点就够了），直接加入到PCR体系中反应就行了，依靠变性温度来破裂细菌释放DNA。

2 其它方法：用枪尖或者牙签沾少量菌，加入到没有加酶的PCR反应体系中，沸水浴5min，冷却后加入酶，开始反应，有些不容易加热破裂的菌预先煮沸一下，可以释放更多的DNA，有利于PCR反应。

3 用Chelex，一些实验室做菌种鉴定的时候习惯用的方法：可以去除一部分杂质，降低PCR反应所受的干扰。

1) 5%-10%chelex 50μl(配法：5-10g chelex 加入100ml TE)+菌苔，在管壁适当研磨，震荡混匀，短暂离心

2) 煮沸：细菌5min，放线菌10-15min

3) 冷却至室温，10000-12000rpm离心5-8min，取上清扩增

注：chelex方法适于细菌、放线菌，chelex提前在65摄氏度水浴中预热，溶液有细小颗粒，吸取时枪尖最好先剪掉，否则不好吸。

 

这3个方法由简到繁，效果当然是依次提高了。这样的直接以细菌为模板进行PCR反应，特别是前两种，适用于大量的筛选和验证，由于加入了细菌本身的其他物质以及难免引入的培养基成分，可能会对PCR反应造成干扰，假阳性假阴性都是可能出现的，所以之后最好还要进一步验证。chelex方法可以去除一定的杂质，干扰较小，但是毕竟也不如直接以DNA为模板效果好。实验者可以根据自己的实际需要来选择合适的方法。