细菌荚膜染色

学习并掌握细菌荚膜染色的原理及方法。

二、原理

细菌的荚膜不易着色，但通透性较好，染料可通过荚膜使菌体着色，所以，染色后在有颜色的菌体周围，有一浅色或无色的透明圏，即为荚膜。为了更清楚地观察荚膜常用负染色法，即用有色的背景来衬托出没有染上颜色的荚膜。

三、材料

1.菌种在阿须贝无氮培养基上培养2〜3d的圆褐固氮菌或硅酸盐细菌。

2.仪器及其他显微镜、酒精灯、载玻片、石炭酸复红染液、1%黑素或绘图墨水、95%酒精、在阿须贝无氮培养基上培养2~3d的圆褐固氮菌或硅酸盐细菌。

四、方法与步骤

  （1）在干净的载玻片中央，滴加无菌水少许。

（2）挑取培养2〜3d硅酸盐细菌斜面菌体制成涂片，晾干（不可用火焰烘干〕。

（3）加酒精1滴固定（不可加热〉，待酒精蒸发掉为止。

(4）石炭酸复红染色液染色3〜4min然后水洗，晾干。

（5）用种环取少许黑素于载玻片—端，另取一块边缘光滑的载玻片与黑素接触并向玻片两侧稍滑动几下使黑素散开，再以均匀速度向涂片部位推动，通过涂片部位使之成一均匀而且厚薄适中的薄层，自然干燥。也可用绘图墨水1滴，滴于涂片部位附近，再用另一玻片的一端接触墨滴，使之向旁边散开，然后拉过涂片部位，注意墨滴不可太大。

⑷镜检、绘图。

操作中应注意的问题：由于荚膜中含有大量的水分和多糖或多肽类物质，因而受热时容易失水收缩使菌体变形，所以染色时不要加热固定。

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